טכניקת הדמיה לחקר תגובת הסידן בתאים נגועים בחיידקים

תקציר

מקור: Smail, Y., et al. הדמיה Ca²⁺ תגובות במהלך זיהום Shigella של תאי אפיתל. J. Vis. Exp. (2018).

סרטון זה מדגים טכניקה לזיהוי תגובה מקומית ועולמית של יוני סידן בעת זיהום שיגלה בתאי אפיתל אנושיים. שיגלה פולשת לתאים המארחים ומשחררת גורמי פלישה, המשפיעים על רמות הסידן התוך-תאי. המשרעת והתדירות של הסידן הציטוסולי המקומי והעולמי נחקרים באמצעות אינדיקטור פלואורסצנטי.

פרוטוקול

1. הכנות

1. הכנת חיידקים
   1. צלחת את החיידקים - זן בר Shigella המבטא את דבק AfaE (M90T-AfaE) - על צלחת אגר טריפטיקז סויה (TCS) המכילה 0.01% אדום קונגו (CR) ודגרה עליהם במשך 18 שעות ב 37 ° C.
      הערה: כדי להגדיל את יכולת השחזור שלהם, לוחות Shigella המתקבלים בשלב 1.1.1 מאוחסנים ב 4 ° C ויש להשתמש בהם בתוך שבוע מכיוון שכל המושבות על מדיום CR יהפכו בסופו של דבר לאדומות עם הזמן.
   2. חסן את מרק TCS לפני התרבית על ידי קטיף 3 מושבות אדומות מצלחות הפסים.
      הערה: חיסון עם 3 מושבות מבוצע כדי להגביל את ההסתברות לבחור שיבוט בודד שהפלסמיד האלים שלו עבר רקומבינצי....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Fluo-4 AM	Invitrogen	F14201
Metamorph גרסה 7.7	הדמיה אוניברסלית
מערכת תאורת CoolLED pE-2	רופר סיינטיפיק
צלחת מיקרו 35 מ"מ, גבוהה	איבידי	81156
ציר סויה טריפטיקז (TCS)	תרמופישר	B11768
אגר TCS	תרמופישר	B11043
קונגו אדומה	סיגמא-אולדריץ'	75768
M90T-AfaE	סאן ואח' 2017		Shigella flexneri serotype V. המבטא את דבק AfaE
ipgD-AfaE	סאן ואח' 2017		זן מוטנטי איזוגני ipgD המבטא את דבק AfaE