$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. זיהום Mtb של תאים שמקורם במונוציטים
הערה: יש לבצע את השלבים הבאים במתקן BSL-3.
- יש להשהות מחדש את כדורית Mycobacterium tuberculosis (Mtb) בתווך RPMI ללא סרום בצינור סטרילי חדש של 50 מ"ל ולהתאים את ריכוז החיידקים הסופי לכ-5 x 106 CFU/mL.
- הסר את מדיום תרבית התאים מלוחות 6 בארות המכילים תאים שמקורם במונוציטים. הוסיפו 1 מ"ל של מדיום סל"ד ללא סרום לכל באר. הוסף 1 מ"ל של תרחיף חיידקי לכל באר כדי לקבל ריבוי של זיהום (MOI) 5: 1, כלומר, 5 x 106 CFU לכל 106 מקרופאגים ב 2 מ"ל / באר לדגור את הלוחות במשך 4 שעות ב 37 ° C ו 5% CO2.
- לאחר ההדבקה, לשטוף את התאים 3 פעמים עם 1 מ"ל של חיץ כביסה סטרילי כדי להסיר חיידקים תאיים. הטו את הצלחת והסירו בזהירות את כל חיץ הכביסה מהפינות. השהה מחדש את התאים שמקורם במונוציטים הנגועים ב- Mtb ב- 2 מ"ל של RPMI שלם בינוני ללא אנטיביוטיקה והמשך לזרימת צביעת ציטומטריה או דגירה על התאים למשך 24 שעות נוספות (או נקודות זמן אחרות) לפני ציטומטריית הזרימה.