דגם עכבר פאוץ' אוויר לקולקציית הפרשה דלקתית הנגרמת על ידי ליפופוליסכריד

במאמר זה

תקציר

מקור: Lu, Q., et al. איתור נדידה וחדירה של נויטרופילים בעכברים. J. Vis. Exp.(2020).

סרטון זה מתאר את ההליך ליצירת שקיק אוויר ברקמה התת עורית של עכברים ואיסוף הפרשות דלקתיות בתגובה למתן lipopolysaccharide in vivo. סרטון זה מכסה גם את ניתוח חדירת הנויטרופילים בכיס האוויר.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. בדיקת שקית אוויר

הזרקת אוויר ראשונה
1. ביום 0, יש להרדים עכברים באופן מלא עם איזופלורן 5% למשך 3 דקות בתא הרדמת גז במהירות של 2 ליטר/דקה, ולשמור על ההרדמה של כל עכבר ביחידת נשימה אחת עם 2% איזופלורן במהירות של 0.5 ליטר/דקה
  הערה: עומק מספיק של הרדמה מובטח על ידי צביטת הבהונות לפני העברת עכברים מהחדר ליחידת הנשימה היחידה. הרגליים לא צריכות לזוז כאשר הבהונות מכווצות.
2. השתמש במסנן 0.22 מיקרומטר המחובר למזרק 5 מ"ל כדי לקבל נפח של 3 מ"ל אוויר מעוקר.
3. הרימו את עורו האחורי של העכבר המורדם בפינצטה והזריקו תת עורית 3 מ"ל אוויר מעוקר באמצעות מחט בגודל 26 גרם x 3/8 אינץ'.
4. לאחר הטיפול, הוציאו את העכברים מיחידת הנשימה. עקוב אחר העכברים כדי לוודא שהם בחיים עד שהם מתחילים לנוע.
הזרקת אוויר שנייה
1. ביום השלישי, הזריקו 3 מ"ל נוספים של אוויר מעוקר לכיס האוויר שהוקם קודם לכן כדי לקיים את שקית האוויר כמתואר בסעיף 1.1.
טיפול
1. ביום 6, 6 שעות לפני ההקרבה, הזריקו טיפולים שונים לתוך נרתיק האוויר. הזריקו 1 מ"ל של מלח חוצץ פוספט (PBS) כבקרה שלילית. הזריקו 1 מ"ל של 1 מיקרוגרם/מ"ל LPS כבקרה חיובית לגרימת דלקת מקומית.
2. הרדימו עכברים באופן מלא עם איזופלורן 5% למשך 3 דקות בתא הרדמה גזים במהירות של 2 ליטר/דקה, ושמרו על ההרדמה של כל עכבר ביחידת נשימה אחת עם 2% איזופלורן במהירות של 0.5 ליטר/דקה. הכינו את חיץ השטיפה לפי טבלת החומרים.
  הערה: עומק מספיק של הרדמה מובטח על ידי צביטת הבהונות לפני העברת עכברים מהחדר ליחידת הנשימה היחידה. הרגליים לא צריכות לזוז כאשר הבהונות מכווצות.
3. עבור כל שקיק אוויר, שטפו את שקית האוויר עם 1 מ"ל של חיץ כביסה ואספו את ההפרשה הדלקתית בצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל. שטפו את שקיק האוויר עם 2 מ"ל של חיץ כביסה 2x ואספו את ההפרשה הדלקתית באותו צינור צנטריפוגה.
4. צנטריפוגה ב 100 x גרם במשך 10 דקות ב RT. להשליך את supernatant ותאי resuspend ב 1 מ"ל של חיץ שטיפה. ספור את התאים כדי לכמת את יחס הנויטרופילים באמצעות מנתח המטולוגיה אוטומטי.
  הערה: ראו תוצאות מייצגות באיור 1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

figure-results-1
איור 1: תוצאות מייצגות של בדיקת שקיות האוויר. (A) איור של בדיקת שקית האוויר. (B) תוצאות מייצגות של חדירת תת-קבוצה לויקוציטים בבדיקת שקית האוויר. PBS: בקרה; LPS: 1 מיקרוגרם/מ"ל LPS. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD.