$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. זיהום
- להדביק יתושי Anopheles stephensi עם Plasmodium berghei ANKA על ידי האכלתם במשך 15 דקות על עכבר gametocytemic. שמור על יתושים נגועים ב 80% לחות ו 21 °C (75 °F).
- אספו נקבות יתושים מהכלוב שלהן 17 עד 22 יום לאחר ארוחת הדם. הניחו אותם על קרח כדי להרדים אותם.
- בעזרת מלקחיים, מניחים שלושה עד ארבעה יתושים על מגלשת זכוכית מכוסה בטיפת מדיום סל"ד קר. מקם את השקופית מתחת למיקרוסקופ.
- בעזרת מלקחיים, בזהירות למתוח את היתוש בין הראש לגוף. בודדו את בלוטת הרוק באמצעות מזרק ומחט. חזור על הליך זה עם היתושים הנותרים.
- אספו את בלוטות הרוק משקופית הזכוכית על ידי מציצתן עם פיפטת זכוכית ואיסופן בצינור צנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל.
הערה: בהתאם לשיעורי הזיהום, בדרך כלל ניתן להשיג 8,000 עד 15,000 ספורוזואיטים זיהומיים לכל בלוטת רוק.
- במשך כ-3 דקות, ריסקו את בלוטות הרוק המבודדות בתוך צינור הצנטריפוגה בעזרת מקל פלסטיק קטן כדי לבודד את הספורוזואיטים מרקמת בלוטת הרוק.
- צנטריפוגה למשך 3 דקות ב 1,000 x גרם ו 4 ° C כדי לטהר את sporozoites מן הרקמה הנותרת.
- פיפטה הסופרנטנט, המכיל את הספורוזואיטים (SPZ), לצינור צנטריפוגה חדש ולספור את הספורוזואיטים המטוהרים בהמוציטומטר נויבאואר.
- התאימו את ריכוז הספורוזואיטים המטוהרים ל-10,000/מ"ל על ידי הוספת מלח חוצץ פוספט.
- הזריקו סך של 1,000 ספורוזואיטים (0.1 מ"ל) לתוך ורידי הזנב של עכברי C57BL/6 כדי ליזום זיהום. כדי להקל על הזריקות, הניחו את עכברי C57BL/6 בריסן והכניסו את הזנבות למים חמים (כ-37°C) כדי לסייע בהדמיה של ורידי הזנב.
הערה: ההזרקה עצמה היא הליך קצר שניתן לבצע תוך מספר שניות.
- פעם ביום, לבדוק פרזיטמיה בשלב הדם על מריחות דם מהיום השלישי ואילך לאחר זיהום SPZ.
- הערך את העכברים פעם ביום עם ציון Rapid Murine Coma and Behavior Scale (RMCBS), החל מהיום החמישי לאחר הזרקת הספורוזויט.
- הערך את העכברים באמצעות דימות תהודה מגנטית (MRI) על פי ציון Rapid Murine Coma and Behavior Scale (RMCBS) ושאלת המחקר שיש להתייחס אליה.