קנולציה של צינור לימפה מזנטרי במודל חולדה לקצירת נוזל לימפה

תקציר

מקור: Trevaskis, N. L., et al. The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: יישום להערכת הובלת תרופות לימפה במעי. J. Vis. Exp. (2015).

סרטון זה מדגים טכניקה לצינור צינור הלימפה המזנטרי בחולדות. שיטה זו מאפשרת גישה ישירה לכל נפח הרכיבים הקיימים בנוזל הלימפה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. קנולציה של צינור הלימפה mesenteric

1. הניחו את בעל החיים כשצדו הימני פונה לכיוון המפעיל. יש לבצע את הניתוח עם או בלי סיוע של מיקרוסקופ כירורגי לפי הצורך.
2. פתח את השכבה העליונה של דופן שריר הבטן עם חתך ישר של 4 ס"מ הנמשך מקו האמצע (תהליך xiphoid) לאגף הימני כ -2 ס"מ מתחת לכלוב הצלעות (שוליים קוסטליים) באמצעות להב אזמל סטרילי (ראה איור 1B).
3. פתחו את השכבות הנותרות של דופן שריר הבטן מ-4 עד 5 מ"מ לרוחב לקו האמצע לאגף הימני בעזרת זוג מספריים כירורגיים קטנים (ראו איור 1B).
4. יש לסגת מהמעי הדק מתחת לדופן שריר הבטן השמאלית ולשמור אותו במקומו באמצעות 2 - 3 חתיכות של גזה סטרילית רוויה במי מלח רגילים.
5. גשר את החולדה מעל מזרק פלסטיק של 10 מ"ל הממוקם אופקית מתחת לגבה של החולדה בגובה הכליה הימנית כדי להקל על הדמיה של צינור הלימפה המזנטרי
.
6. אתר את צינור הלימפה המזנטרי העליון: כלי דם בקוטר של כ-0.5-1 מ"מ המאונך לכליה הימנית ומיד רוסטרלי ומקביל לעורק המזנטרי (כלי דם אדום כהה פועם; ראה איור 1C).
   הערה: בחולדות שלא עברו צום או שמן לפני מינון הכלי הוא לבן, אטום וקל יותר לדמיין אותו מאשר בחולדות שצמו שבהן הוא די שקוף.
7. בדוק את האזור מיד caudal לצינור הלימפה המזנטרי העליון הגדול ואת העורק mesenteric כדי לקבוע אם צינור לימפה נוסף, קטן יותר. אם קיים, לחסום את זרימת הלימפה דרך הצינור על ידי ניתוק הצינור והסתרה עם דבק על, או קשירת תפר סביב הצינור, כדי להבטיח שכל נפח הלימפה הזורם מהמעי נאסף מצינור הלימפה המזנטרי העליון.
8. מעבירים זוג מלקחיים ישרים דרך מיטת השומן הפרי-כלייתית בשוליים התחתונים של הכליה הימנית, ודרך שכבות רקמת החיבור ממש מתחת לווריד הנבוב, בכיוון מקביל לצינור הלימפה המזנטרי העליון.
9. בעזרת קצה המלקחיים אוחזים בצינורית הלימפה ומושכים אותה דרך מיטת השומן הפרי-כלייתית כאשר קצה אחד צמוד מיד לצינור הלימפה המזנטרי והשני יוצא מהחיה ברמה של הכליה הימנית.
10. בודדו את צינור הלימפה המזנטרי משכבות של רקמת חיבור ושומן על ידי דיסקציה קהה. יש להקפיד לא לחדור או לפגוע בצינור הלימפה.
11. לאחר בידוד צינור הלימפה, לעשות חור קטן בצינור הלימפה עם מיקרו מספריים, את הקצה החד של המלקחיים של התכשיטן, או מחט 25 גרם. היזהר לא לנתק לחלוטין את הכלי.
12. ודא כי צינורית הלימפה מלאה לחלוטין בתמיסה נוגדת קרישה (באמצעות מזרק ומחט 25 גרם) ללא רווחי אוויר. הכנס את צינורית הלימפה כ 2 - 4 מ"מ בתוך צינור הלימפה mesenteric דרך החור הקטן בעזרת זוג קטן של מלקחיים.
13. שימו לב לצינורית הלימפה במשך כמה דקות. שימו לב לזרימה הדרגתית של לימפת המעי מהקצה החופשי של הצינורית אם הקנולציה מוצלחת. אם הקנולציה אינה מצליחה, חזור על שלבים 1.8 - 1.12.
14. אם הקנולציה מצליחה, אבטחו את הצינורית על ידי הנחת טיפה קטנה של דבק וטרינרי מעל חור הכניסה לצינור הלימפה. יש להקפיד שלא להסתיר את כלי השיט באמצעות מריחת דבק וטרינרי עודף.
15. בזמן ההמתנה לקיבוע הדבק הווטרינרי, יש להתבונן בזרימת הלימפה במשך מספר דקות כדי לוודא שהליך הקנולציה עבר בהצלחה. לאחר שבטוחים בהצלחת הקנולציה, הסירו בזהירות את חתיכות הגזה שהונחו בחלל הבטן והניחו את המעי הדק במקומו המקורי.
16. יש לשקול מראש צינורות איסוף לימפה, לסמן צינורות לאיסוף דגימות לימפה ודם ולהוסיף תמיסת נוגדי קרישה. הוסף תמיסה נוגדת קרישה מספקת כדי להשיג ריכוז סופי של 1 מ"ג / מ"ל EDTA במים סטריליים או 10 - 20 IU / ml הפרין בלימפה או בדם שנאספו.
17. מניחים צינור איסוף לימפה המכיל נוגד קרישה (שלב 1.16) בקצה הצינורית כדי לאסוף את הלימפה הזורמת בחופשיות.
18. לאחר מכן, תריסריון עבור עירוי של פתרונות rehydration ו / או ניסוחים.

תוצאות

איור 1. תצלומים של (A) הבטן שגולחה כהכנה לצינור הלימפה, (B) דופן שריר הבטן נפתחה עם חתך ישר של 4 ס"מ הנמשך מקו האמצע לאגף הימני כדי לגשת לצינור הלימפה, ו-(C) צינור הלימפה המזנטרי העליון (בעיגול צהוב) בניצב לכליה הימנית.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מי מלח סטריליים	שירותי הבריאות של Baxter	AHB 1307	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה בקסטר 100 מ"ל שקיות מלח, קופסה של 50
70% אתנול במים	כלשהו		ניתן להשתמש בכל מותג
תמיסת כלורהקסידין גלוקונאט (Microshield 4)	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	JJ60243L	ניתן להשתמש בכל מותג. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L
תמיסת בטאדין	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	BU0510	ניתן להשתמש בכל מותג. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =BU0510
איליום קטמיל (קטמין 100 מ"ג/מ"ל)	פרובט ויקטוריה	KETA I 1	http://www.provet.vom.au
הפרין (35000I.U. ב 35 מ"ל	SigmaPharmaceuticals	337220	http://www.sigmaco.com.au
צינורית פוליאתילן (PE) o.d. 0.96 מ"מ x תעודת זהות 0.58 מ"מ	הרחבות מיקרו-צינוריות	PE8050	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה צינורות PE 0.96 x0.58 מ"מ, 30 מ '
צינורית פוליאתילן (PE) o.d. 0.8 מ"מ x תעודת זהות 0.5 מ"מ	הרחבות מיקרו-צינוריות	PE9658	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה צינורות PE 0.8 x0.5 מ"מ, 30 מ
סמנים	כלשהו		ניתן להשתמש בכל מותג
דבק וטרינרי	כלשהו		ניתן להשתמש בכל מותג
23 מחטי מד	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	DN23GX0.75LV	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה כאן היא מחט חד פעמית ליווינגסטון, סטרילי, 23GX0.75inch, 100/BOX. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT= 6&search=DN23GX0.75LV
25 מחטי מד	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	DN25GX1.0LV	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה כאן היא מחט חד פעמית ליווינגסטון, סטרילי, 25GX1.0inch, 100/BOX. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV
1 מ"ל מזרק	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	T3SS01TA	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה מזרק Terumo 1 מ"ל להחליק שחפת 100/קופסה. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
מזרק 10 מ"ל	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	T3SS10SA	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה מזרק Terumo 10 מ"ל Slip 100/Box. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
מקלוני גזה	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	GSC075	ניתן להשתמש בכל מותג ולחתוך אותו לגודל הנדרש. דוגמה כאן היא מקלוני גזה כותנה מלאה 7.5x7.5 ס"מ, 8 רובד. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
כרית חימום	ראטק	WT1	ניתן להשתמש בכל מותג ששומר על טמפרטורה של 37C. דוגמה כאן היא מגש חימום Ratek.
מיקרוסקופ כירורגי	זיס	495005-0014-000	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה לכך היא Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000-C עם Stand S Double Spot ו-KL 300 LED. https:// www.micro-shop.zeiss.com/? l=en&p=us&f=e&i=10143
1 x מספריים כירורגיים קטנים	כלים מדעיים יפים (FST)	14060-09	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה מספריים עדינים FST, 9 ס"מ עם קצה חיתוך 21 מ"מ, חד, ישר. http://www.finescience.ca/ דפים מיוחדים/Products.aspx? ProductId=40&CategoryId=17
2 x מלקחיים עם קצה מעוקל משונן	כלים מדעיים יפים (FST)	11001-13	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה לכך היא מלקחיים בתבנית סטנדרטית FST בגודל 13 ס"מ עם קצה מעוקל בגודל 2.8x1.4 מ"מ. http://www.finescience.ca/ דפים מיוחדים/Products.aspx? ProductId=405&CategoryId=32

'