קנולציה תוך תריסריון במודל חולדות ללימודי אימונופתולוגיה

תקציר

מקור: Trevaskis, N. L. et al., The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport.J. Vis. Exp.(2015)

סרטון זה מדגים קנולציה תוך תריסריון במודל חולדה. לאחר הרדמת החולדה, התריסריון ממוקם ונוצר נקב קטן. צינורית בצורת J עם קצה משופע מוחדרת ומאובטחת בקפידה, והחתך סגור. מודל החולדות המשומרות מאפשר עירוי תוך מעיים למחקרי אימונופתולוגיה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הכנות יום לפני ההליך הכירורגי

1. צום את החולדה בלילה שלפני הניתוח במידת הצורך. ודאו שלחולדה יש גישה חופשית למים.
2. הכינו את התמיסות שיינתנו לחולדה.
   1. הכינו תמיסת התייבשות כגון תמיסת מלח סטרילית או רינגרס.
   2. הכינו תמיסות הרדמה לפי הצורך. חומר ההרדמה ששימש בניסויים שתוארו כאן כלל "קוקטייל 1" שהוכן על ידי שילוב של 1.9 מ"ל קטמין 100 מ"ג/מ"ל, 0.5 מ"ל קסילזין 100 מ"ג/מ"ל, 0.2 מ"ל אצפרומזין 10 מ"ג/מ"ל ו-2.5 מ"ל מי מלח ו"קוקטייל 2" המורכב מ-1 מ"ל קטמין 100 מ"ג/מ"ל ו-0.1 מ"ל אצפרומזין 10 מ"ג/מ"ל. הערה: איזופלורן בשאיפה או סבופלורן עשויים להיות מועדפים מכיוון שהם יכולים לספק מישור כירורגי של הרדמה לתקופה ארוכה יותר של זמן.
3. הכינו תמיסת נוגדי קרישה המכילה 10 מ"ג/מ"ל חומצה אתילאנדיאמיןטטראצטית (EDTA) במים סטריליים או 10 IU/ml הפרין במי מלח כדי לשטוף את צינורית הלימפה. כמו כן, הכינו תמיסת נוגדי קרישה המכילה 2.5 - 10 IU/ml הפרין במי מלח כדי לשטוף את צינורית עורק התרדמה.
4. הכינו את צינורית הפוליאתילן להחדרה לתריסריון (0.96 מ"מ O.D, 0.58 מ"מ תעודת זהות)
   1. חתכו את הצינורית לאורך הנדרש (בדרך כלל 25-30 ס"מ עבור צינורית התריסריון) והניחו שיפוע בקצה הצינורית באמצעות להב כירורגי סטרילי (ראו איור 1).
      הערה: זה מגביר את קלות החדרת הצינורית ומפחית את שכיחות חסימת הצינורית לאחר ההחדרה.
   2. הניחו נקודת עיגון בצורת J בתוך הצינורית התוך-תריסריונית על-ידי לולאת חלק קטן מהצינורית בחזרה על עצמה, חיממו אותה עם פלטה קלה או חמה יותר, ואז חתכו אותה לגודל (ראו איור 1).
5. חבר את צינורית הלימפה למחט 25 גרם ולמזרק המכיל תמיסה נוגדת קרישה (שהוכנה בשלב 1.3). מלאו את צינורית הלימפה בתמיסה נוגדת קרישה והשאירו את התמיסה בצינורית למשך הלילה (O/N) כדי להפחית את שכיחות היווצרות הקריש בצינורית הלימפה במהלך איסוף הלימפה.
6. הכינו צינורות לאיסוף דגימות לימפה ודם. יש לשקול מראש צינורות איסוף לימפה, לסמן צינורות לאיסוף דגימות לימפה ודם ולהוסיף תמיסת נוגדי קרישה. הוסף תמיסת נוגדי קרישה מספקת כדי להשיג ריכוז סופי של 1 מ"ג / מ"ל חומצה אתילאנדיאמין טטראצטית (EDTA) במים סטריליים או 10 - 20 IU / ml הפרין בלימפה או בדם שנאספו.

2. תכשירים מיד לפני תחילת ההליך הכירורגי

1. בדוק את הצינוריות על ידי שטיפתן במי מלח סטריליים או בתמיסת נוגדי קרישה כדי לוודא שהן פטנט.
2. הכינו את החולדה להליך הכירורגי.
   1. מרדימים את החולדה לאורך כל תקופת הניתוח ואיסוף הדגימות.
      1. לדוגמה, להתחיל את ההרדמה באמצעות הזרקה תת עורית של 1.5 מ"ל/ק"ג קוקטייל I (משלב 1.2.2) לתוך קפל עור בחלק האחורי של צוואר החולדה באמצעות מזרק 1 מ"ל המחובר למחט 25 גרם. יש להקפיד על ההרדמה באמצעות הזרקה תוך צפקית של 0.44 מ"ל/ק"ג קוקטייל 2 (משלב 1.2.2) בערך בכל שעה לפי הצורך, באמצעות מזרק של 1 מ"ל המחובר למחט של 25 גרם.
      2. לפני תחילת הניתוח, יש לוודא כי עומק ההרדמה מספיק על ידי התבוננות בקצב הנשימה, תנועת השפם, טונוס השרירים ותגובות לגירויים כגון צביטה בכף הרגל. יש לבצע הרדמה נוספת לפי הצורך.
   2. לגלח את הפרווה מאזורי הניתוח, הכוללים את הצד הימני של הבטן, עבור קנולציה התריסריון.
   3. נקו את אזורי הניתוח באופן אספטי באמצעות תמיסת פובידון-יוד או תמיסת כלורהקסידין וקרצוף אתנול 70%. חזור על פעולה זו 3 פעמים עבור כל אזור, וסיים עם ניקוי סופי עם 70% אתנול.
3. הניחו את בעל החיים בשכיבה גבית על יריעה נקייה מעל כרית כירורגית מחוממת (37°C).

3. קנולציה של התריסריון

1. הניחו את בעל החיים כשצדו הימני פונה לכיוון המפעיל. יש לבצע את הניתוח עם או בלי סיוע של מיקרוסקופ כירורגי לפי הצורך.
2. פתח את השכבה העליונה של דופן שריר הבטן עם חתך ישר של 4 ס"מ הנמשך מקו האמצע (תהליך xiphoid) לאגף הימני כ -2 ס"מ מתחת לכלוב הצלעות (שוליים קוסטליים) באמצעות להב אזמל סטרילי (ראה איור 2B).
3. פתחו את השכבות הנותרות של דופן שריר הבטן מ-4 עד 5 מ"מ לרוחב לקו האמצע לאגף הימני בעזרת זוג מספריים כירורגיים קטנים (ראו איור 2B).
4. יש לסגת מהמעי הדק מתחת לדופן שריר הבטן השמאלית ולשמור אותו במקומו באמצעות 2 - 3 חתיכות של גזה סטרילית רוויה במי מלח רגילים.
5. חבר את צינורית התריסריון למזרק (למשל, 10 מ"ל) מלא בתמיסת התייבשות.
6. זהו את התריסריון כקטע הוורוד הבהיר (עם יותר כלי דם) של המעי הדק, אשר במשיכה עדינה כלפי מטה חושף את הבטן.
7. צור חור נקב קטן בתריסריון כ -2 ס"מ מתחת לצומת הקיבה והתריסריון (הפילורוס) באמצעות מחט סטרילית 23 G.
8. הכנס את הקצה המחובר בצורת J של צינורית התריסריון דרך חור הנקב. יש לאבטח במקומו עם טיפת דבק ציאנואקרילט.
9. התחל הידרציה של החולדה על ידי חיבור הצינורית למזרק התייבשות שהוטען במשאבת עירוי. על פי הספרות, שיעורי התייבשות נעים בין 0.5 - 3 מ"ל / שעה.
10. לאחר השלמת קנולציית הלימפה והתריסריון, סגור את החתך בדופן שריר הבטן עם תפרים. לאחר מכן סגרו את החתך בעור על ידי מריחת מספר טיפות של דבק רקמות (ציאנואקרילט) לאורך צד החתך וצביטה של העור משני צידי החתך יחד.

תוצאות

איור 1. ייצוג דיאגרמטי של צורת הקצה המשופע של עורק התרדמה או צינורית הלימפה, והקצה המשופע בצורת J של צינורית תריסריון.

איור 2. תצלומים של (A) הבטן שגולחה כהכנה לצינור הלימפה, (B) דופן שריר הבטן נפתחה עם חתך ישר של 4 ס"מ הנמשך מקו האמצע לאגף הימני כדי ל...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מי מלח סטריליים	שירותי הבריאות של Baxter	AHB 1307	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה בקסטר 100 מ"ל שקיות מלח, קופסה של 50
70% אתנול במים	כלשהו		ניתן להשתמש בכל מותג
תמיסת כלורהקסידין גלוקונאט (Microshield 4)	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	JJ60243L	ניתן להשתמש בכל מותג. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
תמיסת בטאדין	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	BU0510	ניתן להשתמש בכל מותג. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
איליום קטמיל (קטמין 100 מ"ג/מ"ל)	פרובט ויקטוריה	KETA I 1	http://www.provet.com.au/
איליום קסילזיל (קסילזין 100 מ"ג/מ"ל)	פרובט ויקטוריה	TRO-3828	http://www.provet.com.au/
הזרקת ACP 10 (אצפרומזין 10 מ"ג/מ"ל)	פרובט ויקטוריה	VTG-DACP010020	http://www.provet.com.au/
הפרין (35000 יב"ל ב-35 מ"ל)	סיגמא פרמצבטיקה	337220	http://sigmaco.com.au/
חומצה אתילאנדיאמיןטטראצטית (EDTA) דיסודיום מלח דהידראט	סיגמא-אולדריץ'	E1644	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה כאן היא מלח דיסודיום של EDTA מ Sigma.
צינורית פוליאתילן (PE) o.d. 0.96 מ"מ x תעודת זהות 0.58 מ"מ	הרחבות מיקרו-צינוריות	PE8050	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה צינורות PE 0.8x0.5 מ"מ, 30 מ
צינורית פוליאתילן (PE) O.D. 0.8 מ"מ x תעודת זהות 0.5 מ"מ	הרחבות מיקרו-צינוריות	PE9658	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה צינורות PE 0.96x0.58 מ"מ, 30 מ
סרגל	כלשהו		ניתן להשתמש בכל מותג
סמנים	כלשהו		ניתן להשתמש בכל מותג
מצית סיגריות	כלשהו		ניתן להשתמש בכל מותג
דבק ציאנואקרילט	כלשהו		ניתן להשתמש בכל מותג
23 מחטי מד	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	DN23GX0.75LV	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה כאן היא מחט חד פעמית ליווינגסטון, סטרילי, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN23GX0.75LV
25 מחטי מד	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	DN25GX1.0LV	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה כאן היא מחט חד פעמית ליווינגסטון, סטרילי, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN25GX1.0LV
1 מ"ל מזרק	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	T3SS01TA	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה מזרק Terumo 1 מ"ל להחליק שחפת 100/קופסה. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
מזרק 10 מ"ל	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	T3SS10SA	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה מזרק Terumo 10 מ"ל Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
מקלוני גזה	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	GSC075	ניתן להשתמש בכל מותג ולחתוך אותו לגודל הנדרש. דוגמה כאן היא מקלוני גזה כותנה מלאה 7.5x7.5 ס"מ, 8 רובד. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
כרית חימום	ראטק	WT1	ניתן להשתמש בכל מותג ששומר על טמפרטורה של 37C. דוגמה כאן היא מגש חימום Ratek.
אור כירורגי	מכשיר הרווארד	72-0215 עם 72-0267	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה מכשיר הרווארד V-Lux 1000 מקור אור קר עם Bifurcated Gooseneck Light Guide, שחור, קוטר סיבים 4.7 מ"מ (כל זרוע). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_
מיקרוסקופ כירורגי	זיס	495005-0014-000	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה לכך היא Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000-C עם Stand S Double Spot ו-KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
תפר משי	נמל התעופה הבינלאומי ליווינגסטון	DTSK163019F4	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה כאן היא * שלח פריט זה לחבר שלי 3/8 עיגול חיתוך הפוך משי תפר 3/0 חוט 19 מ"מ. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4
להבי אזמל	כלים מדעיים יפים (FST)	10020-00	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה כאן היא FST אזמל להב #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
ידית אזמל	כלים מדעיים יפים (FST)	10004-13	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה כאן היא ידית אזמל FST #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x מספריים כירורגיים קטנים	כלים מדעיים יפים (FST)	14060-09	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה הנה מספריים עדינים FST, 9 ס"מ עם קצה חיתוך 21 מ"מ, חד, ישר. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 x מלקחיים עם קצה מעוקל משונן	כלים מדעיים יפים (FST)	11001-13	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה לכך היא מלקחיים בתבנית סטנדרטית FST בגודל 13 ס"מ עם קצה מעוקל בגודל 2.8x1.4 מ"מ. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
2 x Hemostats	כלים מדעיים יפים (FST)	13010-12	ניתן להשתמש בכל מותג. לא כל המפעילים משתמשים בהמוסטטים. דוגמה כאן היא FST 12 ס"מ מיקרו יתושים Hemostats עם 20 מ"מ אורך x 1.3 מ"מ רוחב משונן, קצה ישר. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 x מחזיק מחט תפר	כלים מדעיים יפים (FST)	12001-13	ניתן להשתמש בכל מותג. דוגמה כאן היא מחזיק מחט האסלי FST 13cm עם אורך 16 מ"מ x קצה רוחב 1.9 מ"מ. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70

' '