הקמת מודל עכברי של סרטן ריאות מפושט פלאורלי

תקציר

מקור: Yasui, H., et al. פוטואימונותרפיה אינפרא אדום קרוב למודלים עכבריים של הפצה פלאורלית. J. Vis. Exp. (2021)

סרטון זה מדגים שיטה ליצירת מודל עכבר של הפצה פלאורלית על ידי הזרקת תרחיף תאי סרטן ריאות לחלל החזה של עכבר מדוכא חיסוני.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. יצירת מודל הפצה פלאורלי

1. הכינו תאי מטרה המבטאים לוציפראז והשהו 1.0 × 10⁶ תאי מטרה ב-100 מיקרוליטר של מלח חוצץ פוספט (PBS)
   הערה: תאי סרטן תוך חזי כגון סרטן ריאות ו- MPM מתאימים כתאי מטרה. תאים המבטאים לוציפראז הוכנו באמצעות טרנספקציה של גן לוציפראז, וביטוי גבוה של לוציפראז אושר לאחר > 10 מעברי תאים. התאים גודלו בתרבית בינונית בתוספת פניצילין בסרום בקר עוברי 10% (100 IU/mL) וסטרפטומיצין (100 מ"ג/מ"ל). מספר התאים הותאם בהתאם לקצב גדילת הגידול ומהלך הטיפול (1.0. × 10, 5-6.0 × 10,⁶ תאים/משקל גוף).
2. הכינו נקבת עכברים עירומים הומוזיגוטית בת 8-12 שבועות, עם משקל גוף עדיף של 19-21 גרם.
3. מרדימים עכברים במהלך ההליך עם isoflurane (מבוא: 4-5%, תחזוקה 2-3%); לחץ על הזנב עם פינצטה כדי לאשר שאין תגובה.
4. הכינו פקק עם קצף פוליסטירן וחברו את הפקק למחט 30 גרם כך שהקצה יישאר על 5 מ"מ כדי למנוע פגיעה ריאתית. כופפו את קצה המחט עם מלקחיים נקיים או על-ידי הצמדתו כנגד חפץ קשיח שנוקה עם 70% EtOH כדי למנוע דלקת ריאות (איור 1).
   זהירות: היזהר לא לחדור את עצמך. השתמש במלקחיים כדי לכופף את המחט. אין להחזיק את הפקק בעת חיבורו למחט. בטוח יותר לתקוע את הפקק לפני מילוי התאים לתוך המזרק.
5. ממלאים מזרק (1 מ"ל) בתאי מטרה ומחברים מחט 30G עם פקק.
6. לחטא את החזה של החיה עם 70% EtOH לפני ההליך.
7. נוקבים מחט בחזה העכבר דרך החלל הבין-קוסטלי. בשל ההתנגדות תוך כדי מכה בצלעות באותו זמן, קצה המחט נע למעלה ולמטה. לאחר המעבר דרך החלל הבין-קוסטלי, לחצו על המזרק כנגד העכבר והזריקו 100 מיקרוליטר של תאי מטרה (איור 2).
   הערה: העכבר נושם עמוק כאשר המחט נכנסת כראוי לחלל החזה. עם כיפוף קצה המחט ניתן היה להימנע מדלקת ריאות והזרקה לא מתאימה של תאים לריאה.
   הערה: מומלץ לנקב בדופן בית החזה הימני כדי למנוע את הסיכון לניקוב דופן הלב.
8. גלגלו את העכבר 2-3 פעמים כדי להפיץ את התאים ברחבי חלל בית החזה.
9. החזירו את העכבר לכלוב נקי וחם ועקבו עד לאמבולטורי. לאחר ההליך, העכבר יתעורר מהרדמה ויתנהג כרגיל.

תוצאות

איור 1: מכשיר קל בעבודת יד להשתלת תאים. חבר את הפקק העשוי מקצף פוליסטירן למחט 30G כך שהקצה יישאר על 5 מ"מ. קצה המחט צריך להיות כפוף כדי למנוע pneumothorax.

איור 2: הזרקת תאי מטרה לחלל בית החזה. סובב את העכבר הצידה ונקב את המחט לתוך העכבר לכיוון הריאה. ...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מזרק 1 מ"ל	טרומו	SS-01T	לניסוי עכברים
מחט 30 גרם	ניפרו	1907613	לניסוי עכברים
BALB/cSlc-nu/nu	יפן SLC
D-לוציפרין (מלח אשלגן)	קיימן כימיקל	14681	להדמיית ביולומינסנציה ו-DLIT
איזופלורן	וואקו	095-06573	להרדמה של עכברים
0.25w/v% טריפסין-1mmol / l תמיסת EDTA 4Na עם פנול אדום	וואקו	209-016941	לתרבית תאים
RPMI-1640 עם L-גלוטמין ופנול אדום	וואקו	189-02025	לתרבית תאים