צביעת פלואורסצאין במודל אוטואימוני של חולדת עין יבשה לבחינת נזק לקרנית

תקציר

מקור: Hou Ahiua, et al. מודל אוטואימוני כרוני של חולדת עין יבשה עם עלייה בתאי T של זיכרון אפקט ברקמת גלגל העין. J.Vis. Exp. (2017)

סרטון זה מדגים את צביעת הקרנית הפגועה באמצעות צבע פלואורסצאין כדי להעריך את היקף מחלת העין היבשה האוטואימונית במודל חולדה. כתמי הפלואורסצנטיות הירוקים של סיבי הקולגן המוכתמים מצביעים על תאים פגועים באפיתל הקרנית.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הערכת תכונות העין היבשה

למדוד נזק לקרנית עם כתמים פלואורסצאין.

1. הוסף 2 μL של 0.2% fluorescein לקרנית החולדה. באופן פסיבי לפתוח ולסגור את עפעפיים חולדה 3 פעמים עם אצבע כפפה כדי להפיץ את צבע פלואורסצאין על פני העין.
2. לאחר דקה, לצייר 1 מ"ל של מלח עם מזרק 3 מ"ל (ללא כל חיבור מחט), למקם את המזרק על 2-3 מ"מ קדמי הקרנית, ולדחוף בעדינות מלוחים על העין.
3. קבל תמונות תחת מסנן כחול קובלט (כלומר, ~ 400 ננומטר) של מיקרוסקופ הדמיה עינית עם אורות הרקע כבויים.
   הערה: התמונות נותחו לאחר מכן על ידי מערכת דירוג ששונתה מפרסומים קודמים. לאחר מכן נותחו התמונות על ידי דירוג סובייקטיבי של מספר, שטח ועוצמה של הכתמים הירוקים מ-0 עד 2, כאשר 0 מציין את היעדרותם, 1 מציין צביעת ניקוב של פחות מ-50 כתמים ו-2 מציין צביעת ניקוב של יותר מ-50 כתמים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מגיב
תמיסת נתרן פלואורסצאין	Bausch & Lomb U.K מוגבלת	נה
ציוד
מיקרוסקופ סטריאו עם תאורת טבעת ומצלמה	קרל זיס	נה