$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית או מודל EAE
- אינדוקציה של מודל EAE
- יש להשתמש בעכברות בנות 10 עד 13 שבועות 129S4/SvJae×C57BL/6 להשראת EAE.
- תן לעכברים זריקה תת עורית, לגב העליון והתחתון, של פפטיד MOG35 - 55 (מיאלין אוליגודנדרוציטים גליקופרוטאין) (200 מיקרוגרם), מתחלב ב 200 μl להשלים האדג'ובנט של פרוינד (CFA) המכיל 400 מיקרוגרם Mycobacterium tuberculosis.
הערה: כבקרת דמה שלילית, שאינה גורמת למחלה, ניתן להשתמש באדג'ובנט לא שלם של פרוינד המכיל Mycobacterium tuberculosis, באותו נפח ובאותו מסלול.
- לאחר מכן, ושוב 24 שעות לאחר מכן, לתת לעכברים זריקה תוך צפקית של רעלן שעלת (בסך הכל 0.2 מיקרוגרם, מדולל ב 200 μl פוספט חוצץ מלוחים, PBS). השתמש בעכברים לא מטופלים כקבוצת ביקורת, כדי להיות מסוגל להשוות חולים עם בעלי חיים בריאים.
הערה: ניתן גם לגרום EAE עם 200 - 300 מיקרוגרם MOG35 - 55 פפטיד, 300 - 500 מיקרוגרם של שחפת Mycobacterium ב CFA, ו 0.2 - 0.3 מיקרוגרם שעלת רעלן בנפח של 0.1 - 0.2 מ"ל לכל הזרקה.
- החל משבוע לאחר ההזרקה, יש לבדוק עכברים מדי יום לאיתור תסמינים קליניים (ראה שלב 1.2.1)
הערה: יום הופעת המחלה משתנה בניסויים שונים, אך בתנאים במעבדה שלנו, זה סביב היום ה-11 ולכן כאן היום ה-14 מוגדר כ-3 ימים לאחר הופעת המחלה. כל העכברים במחקר הנוכחי פיתחו תסמינים קליניים.
2. ניקוד העכברים
- סווג תסמינים קליניים לפי ציונים קליניים כדלקמן: 0) ללא סימנים, 0.5) שיתוק דיסטלי של הזנב, 1) שיתוק מוחלט של הזנב, 1.5) זנב רפוי וחולשה קלה של רגליים אחוריות, 2) זנב רפוי וחולשה חמורה של רגליים אחוריות, 2.5) זנב רפוי ושיתוק של רגל אחורית אחת, 3) זנב רפוי ושיתוק של שתי הרגליים האחוריות, 3.5) שיתוק של שתי הגפיים האחוריות וחולשה של גפה קדמית אחת (עכברים שהשיגו ציון זה עברו המתת חסד, בהתאם להנחיות האתיות המקומיות).