Method Article

בדיקה חיידקית בסרום לפעילות חיידקית בתיווך משלים של נוגדנים

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Weerts, H. P., et al. A High-through-throughput-specific Bactricidal Assay. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מדגים טכניקה להערכת הפעילות החיידקית בתיווך משלים של נוגדנים הנמצאים בסרום. גישה זו משלבת סרום מבודד עם חיידקים פתוגניים וחלבוני השלמה אקסוגניים. עם הדגירה, החיידקים גדלים על צלחת אגר, ואת המושבות המיוצרות מכומתים כדי למדוד את titer bactricidal בסרום.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הכינו חיידקים משלימים ומכוונים

  1. הכינו משלים ארנב תינוק (BRC)
    הערה:     קריטריונים מפורטים לבחירת מגרש משלים ניתן למצוא כאן: https://www.vaccine.uab.edu/uploads/mdocs/UAB-MOPA.pdf
    1. להשיג BRC קפוא ולהפשיר עם מים קרים זורמים. מערבבים פיזית את BRC כל ~ 10-20 דקות עד להפשרה מלאה. אין לחשוף את BRC למחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים ונשנים.
    2. בזמן ש-BRC מפשיר, יש לסמן צינורות צנטריפוגות בנפח 1.5 מ"ל, 5 מ"ל או 15 מ"ל. הניחו את הצינורות המסומנים על קרח לקירור מוקדם. Aliquot נפח תקין BRC צינורות צנטריפוגות מקורר מראש (לאחר מילוי, מיד להחזיר כל צינור לקרח). לאחסן aliquots ב ≤ -70 °C במקפיא.
      הערה:

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: לוחות LBA לאחר התפתחות צבע. נציג S. flexneri 3a מיקרו-מושבות חיידקים גדלו בן לילה לגודל המתאים. אגר כיסוי נוסף ומושבות פיתחו צבע אדום על ידי הפחתת תרכובת TTC באגר שכבת-על.

figure-results-2
איור 2: ממשק התוכנה Integrated Colony Enumerator (NICE) של NIST.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
ג'לטיןסיגמאG9391סוג B, אבקה, BioReagent, מתאים לתרבית תאים
TTC (2,3,5-טריפנילטטרזוליום כלוריד)סיגמאT8877≥98.0% (HPLC)
נתרן אזיד (NaN3)סיגמאS2002≥99.5%
בייבי ארנב משליםפלפריז31061-3גילאי 3-4 שבועות
HBSS עם Ca2+/Mg2+Invitrogen14065-56ללא פנול אדום
LB אגר (לנוקס)סיגמאL2897מדיום גידול מיקרוביאלי אבקתי
בקטו אגרב.ד.214010אבקה, (C12H18O9)n
גליצרולסיגמאG5516עבור ביולוגיה מולקולרית, ≥99%
מרק LB (לנוקס)סיגמאL3022מדיום גידול מיקרוביאלי אבקתי
צלחת פטרי מרובעתסיגמאZ617679-240EA120 מ"מ x 120 מ"מ
צלחת Assayכוכב משנה379996 צלחת U-תחתונה טובה עם מכסה
תוכנת נייסאוניברסיטת אלבמה בברמינגהםftp://ftp.nist.gov/pub/physics/mlclarke/NICE/

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Serum Bactericidal AssayComplement Mediated Bactericidal ActivityAntibody LPS BindingSerial Dilution ProtocolBacterial Colony EnumerationTTC Overlay AgarHeat Inactivated ComplementMicrobiological IncubatorDigital Colony AnalysisGram Negative Bacteria

Related Articles