הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
1.2K צפיות
⸱
8 ביולי 2025
מקור: Sarkar, A. et al., כימות של גידול תוך תאי בתוך מקרופאגים היא שיטה מהירה ואמינה להערכת האלימות של טפילי לישמניה.J. Vis. Exp.(2018)
סרטון זה חוקר את האלימות של לישמניה על ידי טיפול במקרופאגים עם פרומסטיגוטים מטאציקליים, וכתוצאה מכך היווצרות של אמסטיגוטות תוך-תאיות. האישור לאלימות הלישמניה מושג באמצעות צביעת צבע פלואורסצנטי של חומצת גרעין. תובנה זו יכולה לתרום לפיתוח טיפולים חדשים ללישמניאזיס.
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. בידוד והתמיינות של מקרופאגים שמקורם במח עצם (BMM)
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
איור 1: המחשה מייצגת של זיהום BMM עם אמסטיגוטים אקסניים אלימים (A) ופרומסטיגוטים לא אלימים בשלב היומן (B) של L. amazonensis.תמונות אימונופלואורסצנטיות של מקרופאגים שבודדו מעכברי BALB/c, שעה ו-48 שעות לאחר ההדבקה. מקרופאגים נגועים עובדו עבור immunofluorescence כמתואר בפרוטוקול. קרומי PV הוכתמו בנוגדן חד-שבטי נגד עכבר מסוג Lamp1 (דילול 1:1,000) למשך שעה אחת, ולאחר מכן דגירה של שעה אחת.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צלחת תרבית תאים 6 באר | סלסטאר | 657160 | |
| אדנין | אקרוס אורגניקס | AC147440250 | |
| קצוות לפיפט מחסום אירוסול (100-1000 μL) | פישרברנד | 02-707-404 | |
| קצוות Pipet מחסום אירוסול (20-200 μL) | פישרברנד | 02-707-430 | |
| קצוות Pipet מחסום אירוסול (2-20 μL) | פישרברנד | 02-707-432 | |
| Bard-Parker צלעות גב פחמן פלדת להב כירורגי #10 | אספן כירורגי | 371110 | |
| BD Luer-Lok טיפ 10 מ"ל מזרק | בקטון דיקינסון (BD) | 309604 | |
| BD Precisionglide מחט, 25G | בקטון דיקינסון (BD) | 305124 | |
| צלחת תרבית תאים 35 מ"מ x 10 מ"מ | סלסטאר | 627 160 | |
| בקבוק תרבית תאים | סלסטאר | 660175 | |
| כיסוי משקפיים: עיגולים 12 מ"מ | פישרברנד | 12-545-80 | |
| DAPI (4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול, דיהידרוכלוריד) | Invitrogen | D1306 | |
| די-ביוטין | ג'יי טי בייקר | C272-00 | |
| EDTA | סיגמא אולדריץ' | עורכים | |
| אלכוהול אתילי 200 הוכחה | פארמקו-AAPER | 111000200 | |
| פלקון 100 מ"מ x 15 מ"מ צלחת פטריט פוליסטירן ללא טיפול TC | קורנינג | 351029 | |
| סרום בקר עוברי | סראדיגם | 1500-500 | |
| צרפת | סיגמא אולדריץ' | F8016 | |
| מיקרוסקופ פלואורסצנטי | ניקון | E200 | |
| עיזים נגד עכבר IgG טקסס אדום | Invitrogen | T-862 | |
| עז נגד ארנב IgG AlexaFluor488 | Invitrogen | A-11034 | |
| חמין | טוקיו כימית התעשייה ושות' בע מ | H0008 | |
| HEPES (1M) | גיבקו | 15630-080 | |
| איזוטון II מדלל | בקמן קולטר | 8546719 | |
| ל-גלוטמין | ג'מיני | 400-106 | |
| בינוני 199 (פי 10) | גיבקו | 11825-015 | |
| נא פירובט (100 מ"מ) | גיבקו | 11360-070 | |
| פרפורמאלדהיד | אלפא עזר | 43368 | |
| פניצילין/סטרפטומיצין | ג'מיני | 400-109 | |
| מלח חוצץ פוספט (-/-) | תרמופישר | 14200166 | |
| צינורות צנטריפוגה חרוטית פוליפרופילין 15 מ"ל | סלסטאר | 188 271 | |
| צינורות צנטריפוגה חרוטית פוליפרופילין 50 מ"ל | סלסטאר | 227 261 | |
| מגיב נוגד דהייה ProLong Gold | תרמופישר | P36930 | |
| עכברוש נגד עכבר נוגדן מנורה-1 | מחקרים התפתחותיים בנק היברידיומה | 1D4B | |
| M-CSF אנושי רקומביננטי | פפרוטק | 300-25 | |
| רייכרט המוציטומטר קו בהיר | האוזר סיינטיפיק | 1492 | |
| RPMI בינוני 1640 (1X) | גיבקו | 11875-093 | |
| טריטון X-100 פעילי שטח | מיליפור סיגמא | TX1568-1 | |
| כחול טריפאן | סיגמא אולדריץ' | T8154 | |
| מספריים עדינים, 120 ס"מ | VWR | 82027-582 | |
| מלקחיים מנתחים, טיפ דק | VWR | 82027-386 | |
| שקופיות מיקרוסקופ | VWR | 16004-368 | |
| מונה חלקיקים קולטר Z1, סף כפול | בקמן קולטר | 6605699 |
