הדמיית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית להערכת אובאיטיס במודל עכבר

תקציר

מקור: John, S., et al. Primed Mycobacterial Uveitis (PMU) כמודל לאובאיטיס פוסט-זיהומית. J. Vis. Exp. (2021)

סרטון זה מדגים טכניקת הדמיה in vivo לזיהוי וכימות דלקת עיניים במודל עכברי של אובאיטיס פוסט-זיהומית. הטכניקה, המכונה טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT), מייצרת תמונות חתך ברזולוציה גבוהה של העין להערכת התקדמות המחלה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הכנת אנטיגן להזרקה תת עורית

1. יש לבצע את כל ההליכים בסעיף זה בתוך מכסה אדים כימי כדי למנוע שאיפה או מגע עור עם אבקת Mycobacterium tuberculosis (Mtb) H37Ra. טפל בהתאם למדיניות המוסדית שלך עבור האדג'ובנט של Complete Freund (בדרך כלל BSL-1). זה כולל שימוש בכפפות עמידות בפני כימיקלים, משקפי בטיחות ובגדי עבודה מגנים (מעיל מעבדה).
2. השתמש בטכניקה סטרילית טובה כדי למנוע זיהום של ריאגנטים שיוכנסו לבעלי חיים ניסיוניים.
3. הפוך את תרחיף Mtb ב- PBS על ידי ערבוב 5 מ"ג של אבקת M. tuberculosis H37Ra עם 2.5 מ"ל של PBS קר בצינור מיקרוצנטריפוגה של 5 מ"ל. מערבלים פעם אחת למשך 30 שניות ואז מניחים על קרח.
4. כדי ליצור מתלה עדין של H37Ra ב-PBS, הפעילו את המתלים על קרח למשך 5 דקות.
   1. שחרר את הידוק הגוף של יחידת הממיר ונקה את הבדיקה עם מקלון אלכוהול 70% (v/v).
   2. הפעל את הסוניקטור, כוונן את הגדרת ההפעלה ל-4 על-ידי סיבוב ידית בקרת ההפעלה, וטבול את קצה הגשושית באבקה מיקובקטריאלית המכילה PBS. ודא שקצה הבדיקה שקוע לפחות במחצית מעומק הדגימה ושקצה הבדיקה אינו נוגע בדופן צינור המיקרוצנטריפוגה.
5. ערבבו את התערובת על קרח למשך 30 שניות, עצרו למשך 30 שניות וחזרו על הפעולה במשך 5 דקות בסך הכל כדי לפזר את האבקה במלואה לתרחיף אחיד מבלי לחמם את הנוזל.
6. מוסיפים 2.5 מ"ל של האדג'ובנט הלא שלם של פרוינד לתערובת וחוזרים על תהליך הסוניקציה על קרח עד שהתחליב יוצר מרקם דמוי משחת שיניים.
7. הגדר את ההספק ל- 0 באמצעות ידית הבקרה וכבה את היחידה כדי לסיים את הסוניקציה. הסר את הקצה מהמתלה ונגב את הבדיקה עם ספוגית אלכוהול.
8. אחסנו את תחליב האנטיגן בטמפרטורה של 4°C. הכנת אצוות של האמולסיה תעזור להבטיח עקביות בין הניסויים. ניתן לאחסן את התחליב ב -4 מעלות צלזיוס למשך עד 3 חודשים.

2. הזרקה תת עורית

1. יש לבצע הזרקה תת עורית שבוע לפני ההזרקה התוך ויטריאלית (יום 7-).
2. טען מזרק 1 מ"ל (ללא מחט מחוברת) עם תחליב mycobacterial. בשל הצמיגות והאטימות של התחליב, בועות אוויר קשות לצפייה יכולות למלא את המזרק.
   1. כדי למנוע בועות אוויר במזרק, לאחר העמסת 0.2-0.3 מ"ל תחליב, הפוך את המזרק (קצה פונה כלפי מעלה) והקש בעדינות על המזרק שוב ושוב על קצה הדלפק כדי להביא את הבועות אל פני השטח.
3. מוציאים את האוויר מהמזרק וממשיכים למלא את המזרק. יש להפוך ולטפוח לסירוגין עד למילוי.
4. מניחים מחט 25 גרם על המזרק ומקדמים את התחליב למילוי המחט. אחסנו את המזרק על קרח עד לשימוש.
5. כדי לבצע את ההזרקה התת עורית בבטחה, יש להרדים את העכבר או להשתמש בשיטות ריסון הומניות המאפשרות גישה נוחה לאחורי החיה.
6. להרדים לצורך הזרקה תת עורית, הכניסו את בעל החיים לתא אינדוקציה איזופלורני (3%-4% לזירוז ו-1%-3% לתחזוקה). לאחר ההרדמה, ודא שלעכבר יש קצב נשימה איטי ואינו מראה סימנים של מצוקה נשימתית.
7. מניחים את הזריקות תת עוריות על פני השטח הגבי של הירכיים או על פני השטח הגחוני של הרגליים פרוקסימלי לאזור בלוטות הלימפה המפשעות.
   1. הכנס בזהירות את המחט כדי למנוע הזרקה לתוך השריר. הזריקו 0.05 מ"ל של תחליב Mtb לחלל התת עורי. אין להסיר את המחט מיד על מנת לאפשר הזרקה מלאה של התחליב העבה.
   2. חזור על ההזרקה בצד שמאל ובצד ימין עבור סך של 0.1 מ"ל לכל חיה.
8. במקרה של הרדמה, הניחו את העכבר על כרית חימום חמה עד להחלמה מלאה. אל תשאיר את העכבר ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבת עצם החזה.
9. החזירו את העכבר לכלוב עם החלמתו המלאה ותייגו את כרטיס הכלוב עם תאריך ההזרקה התת עורית.
10. לספק משככי כאבים עם פרצטמול דרך הפה (200 מ"ג / ק"ג / יום), אבל לא NSAIDs כמו סוכנים אנטי דלקתיים יכול להשפיע על השראת uveitis.

3. הכנת מלאי אנטיגן להזרקה תוך ויטריאלית

1. בצע את כל ההליכים בסעיף זה בתנאים סטריליים מתאימים כדי למנוע זיהום של השעיית Mtb תוך ויטריאלי.
2. בצע את המתלים intravitreal.
   1. עבור השראת panuveitis קלה עד בינונית, להפוך את התרחיף intravitreal בריכוז 5 מ"ג / מ"ל על ידי הוספת 5 מ"ג של תמצית mycobacteria ל 1 מ"ל של 1x PBS.
   2. עבור השראת panuveitis בינוני עד חמור, להפוך את התרחיף intravitreal בריכוז 10 מ"ג / מ"ל על ידי הוספת 10 מ"ג של תמצית mycobacteria 1 מ"ל של 1x PBS.
3. מערבלים פעם אחת למשך 30 שניות ואז מניחים על קרח.
4. כדי ליצור מתלה עדין של H37Ra ב-PBS, יש לסובב את המתלים על קרח למשך 10 דקות כמתואר בשלב 1.4. Aliquot פתרון מלאי זה בנפחים 100 μL ולאחסן ב -20 °C.
5. לפני השימוש, יש להפשיר בטמפרטורת החדר ולערבב על אש גבוהה במשך דקה. יש לשמור את האליציטוטים על קרח בעת העברתם למתקן בעלי החיים.

4. הליך הזרקה תוך ויטריאלית ביום 0

1. הכנת בעלי חיים
   1. יש ללבוש כפפות בדיקה מותאמות, ולהניח את העכבר על מאזן שקילה כדי לקבל את משקלו בגרמים.
   2. תן זריקה intraperitoneal של 0.02 מ"ל / גרם משקל גוף של תמיסה המכילה 100 מ"ג / מ"ל קטמין ו 20 מ"ג / מ"ל קסילזין מעורבב עם מים סטריליים כדי להרדים את החיה. גישה חלופית כוללת אינדוקציה באמצעות ~1.5% איזופלורן (בשאיפה).
   3. המתן כ-2 דקות עד שהעכבר יירדם, ולאחר מכן הכנס את העכבר לקופסת חימום וכסה את המכסה. בצע בדיקות רפלקס כאב כמו צביטת אוזניים, בוהן וזנב כדי להעריך את עומק ההרדמה עבור ההליך.
   4. לאחר השינה, להרדים את הקרנית עם טיפה אחת של 0.5% (v/v) tetracaine. הימנע מקבל טטרקאין ליד האף או הפה של העכבר. לאחר 10 שניות, יש לטפוח את עודפי הנוזל.
      הערה: נצפה כי הרחבת הקשתית והדמיית החדר הקדמי (AC) משתפרים כאשר ניתנת הרדמה מקומית, אולי בשל דיכוי משופר של רפלקס הקרנית עם ההרדמה המערכתית והאקטואלית המשולבת. עם זאת, צעד זה יכול להיות מושמט אם תרצה.
   5. להרחיב את האישון עם טיפה אחת של 2.5% (v/v) phenylephrine. יש לנקוט משנה זהירות כדי להימנע מטיפות עודפות שעלולות להיכנס לאף או לפה. לאחר 2-3 דקות, יש לטפוח את עודפי הנוזלים.
   6. כדי להפחית את הסיכון לאנדופטלמיטיס, יש להוסיף טיפה אחת של 5% בטאדין על פני העיניים והשיער שמסביב. להשאיר על העין למשך 2-3 דקות.
      הערה: בצע את כל ההליכים בסעיף זה בתנאים סטריליים מתאימים למניעת אנדופטלמיטיס.
   7. יש להסיר בטדין ולכסות את העין עם היפרומלוז (0.3%) או ג'ל עיניים קרבומר 0.2% w/w) כדי למנוע יובש בהרדמה. זה גם יעזור למנוע היווצרות קטרקט.
2. הגדרת מערכת המיקרו-הזרקה
   1. בצעו את ההזרקה התוך-ויטריאלית באמצעות מיקרו-משאבה שמחוברת לבקר משאבת מיקרו-מזרק ולמזרק הזרקה (איור 1A-C). לחילופין, יש להזריק מחט 33 גרם המחוברת למזרק המילטון כמתואר בסעיף קטן 4.4.
   2. חבר מחט 34 G למחזיק ההזרקה כדי להרכיב את המזרק. שחררו את מכסה הבורג הכסוף בקצה הקדמי של מחזיק ההזרקה והחליקו את המחט לתוך גוף המחזיק בערך באמצע הדרך. הדקו את אצבע מכסה הבורג הכסופה בחוזקה.
   3. חבר את הצינורית למחזיק ההזרקה כאמור בשלבים 4.2.4-4.2.5.
   4. כדי להכניס את הצינור על מחזיק ההזרקה, שחררו את בורג הפלסטיק בקצה האחורי של המחזיק, החליקו את הצינור דרך האטם שבתוכו והדקו את הבורג.
   5. שמרו על רווח קל בקצה הצינורית כדי למנוע נזק לצנרת במהלך ההזרקה. עיין באיור 1C.
   6. הפשיר aliquot 100 μL של השעיית מלאי mycobacterium.
   7. מוסיפים 3 μL של תמיסת נתרן פלואורסצאין 1% (AK-Fluor) ומערבלים היטב.
   8. טען מזרק 10 μL עם תערובת אנטיגן ופלואורסצאין מבלי לכלול בועות אוויר.
   9. מוציאים את מחט ההעמסה מהמזרק, ומחליקים את הצינור דרך אטם מכסה הבורג הכסוף עד שהקצה מגיע לסימן האפס בגוף המזרק.
   10. ברגע שקצה הצינור מיושר כראוי למיקום הרצוי, הדקו את אצבע מכסה הבורג בחוזקה.
   11. יש לשטוף את התמיסה במזרק דרך צינור ההזרקה כדי לטעון את המערכת במלואה. לאחר מכן חזור על שלבים 4.2.8-4.2.11 כדי לטעון מחדש את המזרק להזרקה.
   12. כדי להתקין את המזרק הטעון על המיקרו-משאבה, לחץ על כפתור שחרור המהדק בקצה המשאבה כדי לפתוח את מהדקי המזרק.
   13. מקם את מכסה הבוכנה בתוך מחזיק מכסה הבוכנה בקצה האחורי של המיקרו-משאבה.
   14. לאחר מכן החליקו את צווארון המזרק על מעצור הצווארון ואת גוף המזרק לתוך מהדק המזרק.
   15. שחררו את כפתור המהדק והדקו את בורג התמך של הבוכנה. עיין באיור 1D.
   16. החלק את מחזיק ההזרקה ואת המחט דרך מהדק ה- o במכשיר ההזרקה הסטריאוטקטי. זוהי פלטפורמה מותאמת אישית; לחלופין, ניתן להחזיק ולמקם את המזרק באופן ידני.
   17. הגדר את נפח העירוי ואת קצב נפח העירוי בבקר משאבת המזרק הזעיר להזריק 500 nL למחזור בקצב של 40 nL/s, בהתאמה.
       הערה: ניתן להשתמש בקצב הזרקה מהיר יותר, עם זאת, ניתן לחוות יותר ריפלוקס לפני שניתן יהיה להשיג מיקום מחדש של המחט.
   18. בדוק את המערכת כדי להבטיח תפקוד תקין לפני ביצוע הזרקה intravitreal.
       הערה: כאשר מערכת ההזרקה מתפקדת כראוי, הפעלת מחזור הזרקה באמצעות דוושת הרגל או כרית הבקרה תייצר תנועה נראית לעין של מחזיק מכסה הבוכנה וטיפה קטנה של נוזל ירקרק תיראה בקצה המחט. במקרה שלא מיוצר נוזל, הפעל מחזורים נוספים או שטף וטען מחדש את המזרק.
   19. לפני הזרקת העין, נגבו בעדינות את המחט עם פד אתנול 95%.
3. הליך הזרקה תוך ויטריאלי
   1. העכבר ממוקם על מנגנון סטריאוטקסי לביצוע הליך ההזרקה.
   2. שמור על הבמה/פלטפורמה שעליה העכבר מונח חם על ידי הצמדת 2-3 מגבות נייר על פני השטח שלו.
   3. מקם את העכבר במצב נוטה על הרציף. השתמשו במוטות האוזן הימנית והשמאלית כדי לתקן בעדינות את ראשו של בעל החיים. עיין באיור 1E.
   4. מקם את העכבר וכוון אותו מתחת לטווח כך שהיבט האף העליון של עין ימין יהיה גלוי.
   5. השתמש במחט 30 גרם כדי להזיז את הריסים ולחשוף את הסקלרה. דמיינו את הלימבוס ואת כלי הדם הרדיאלי.
   6. השתמש במחט סטרילית של 30 גרם כדי ליצור חור מנחה בלובן העין 1-2 מ"מ אחורי ללימבוס.
   7. הכנס את מחט 34 G המחוברת למחזיק ההזרקה לעין דרך חור המדריך בזווית שתמנע את העדשה, אך הכנס את קצה המחט לחלל הזגוגית.
   8. באמצעות בקר משאבת מזרק מיקרו, בזהירות להזריק 1 μL של תמצית Mtb לתוך חלל הזגוגית. במקרה של ריפלוקס עקבי, יש להגדיל את נפח ההזרקה ל-1.5 μL כדי להבטיח מתן מינון הולם.
      הערה: לבקרות דמה, יש להזריק 1 μL של PBS לעין החיה.
   9. ודא מיקום intravitreal על ידי הדמיה של רפלקס ירקרק בעין. עיין באיור 1F.
   10. לאחר 10 שניות, למשוך את המחט מן העין. שימו לב לכל ריפלוקס.
   11. הסר את העכבר מהפלטפורמה, הנח 0.3% היפרומלוז או משחת עיניים קרבומר 0.2% w / w על שתי העיניים להגנה על הקרנית, ועבור לקופסת חימום ההתאוששות.
   12. אל תשאיר את העכבר ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבת עצם החזה. אין לחזור לחברתם של בעלי חיים אחרים עד להחלמה מלאה.
   13. כאשר העכבר ער לחלוטין, חזור לכלוב והוסף בקבוק מים תרופתי (200-300 מ"ג/ק"ג/יום). יש לתייג את כרטיס הכלוב עם תאריך הזרקת ה-IVT.
   14. זריקות intravitreal הם בדרך כלל נסבלים היטב. סימנים קליניים שעשויים להצביע על כאב ועל הצורך בהסרה מהמחקר כוללים התקרחות פריוקולרית (המעידה על טראומה עצמית), כיב בקרנית, ירידה במשקל ויציבה כפופה.
4. שיטה חלופית להזרקה תוך ויטריאלית
   הערה: הליך זה מבוצע באמצעות מיקרוסקופ הפעלה ומחט 33 G על מזרק.
   1. החזיקו את העין במקומה בעזרת זוג מלקחיים.
   2. לאחר מכן יש למרוח ג'ל עיניים קרבומר 0.2% w/w או 0.3% ג'ל עיניים היפרומלוז ולהניח כיסוי עגול (קוטר 7 מ"מ) על העין.
   3. הרכיבו מחט היפודרמית 33 G על מזרק המילטון 5 μL והכניסו אותה בערך 2 מ"מ ללימבוס הקרנית עם זווית הזרקה ~ 45 מעלות.
   4. יש לכוון את שיפוע המחט לתוך הזגוגית, לעצור בין העדשה לדיסק האופטי (מנקודת מבטו היחסית של המנתח, זה מעל/מכסה את הדיסק האופטי - כ-1.5 מ"מ ממקום ההחדרה), ולהזריק 2 μL של Mtb (ב-2.5 ug/μL ב-PBS) באיטיות.
   5. החזיקו את המחט במקומה לזמן קצר (כדי להפחית את כמות הריפלוקס של ההזרקה) ולאחר מכן הסירו אותה.
   6. לאחר ההזרקה, להניח את הגלובוס על ידי שחרור המלקחיים. ניתן לתת טיפה של 1% עם משחת כלוראמפניקול לעין בשלב זה כדי לספק הגנה נוספת מפני אנדופתלמיטיס לאחר הזרקה.
   7. לאחר ההזרקה יש לעבור לקופסת חימום ההתאוששות כאמור בשלבים 4.3.11-4.3.13.

5. הדמיית OCT לזיהוי וכימות אובאיטיס

1. הכנת בעלי חיים
   1. הרדמת העכבר כמתואר בשלבים 4.1.2-4.1.4
   2. להרחיב את האישון עם טיפה אחת של 2.5% phenylephrine. יש לנקוט משנה זהירות כדי להימנע מטיפות עודפות שעלולות להיכנס לאף או לפה. לאחר 2-3 דקות, יש לטפוח את עודפי הנוזלים.
   3. יש להניח על העין 0.3% היפרומלוז או 0.2% עם ג'ל קרבומר כדי למנוע יובש בזמן הרדמה. זה גם יעזור למנוע היווצרות קטרקט.
   4. עטפו את העכבר בשכבה של גזה כירורגית כדי לשמור על חום הגוף והניחו אותו על קלטת החי. מקמו את הראש עם מוט הנשיכה.
2. רכוש את תמונות OCT של החדרים הקדמיים והאחוריים.
   הערה: אם אתם מקבלים תמונות של החדר הקדמי והאחורי, השג תחילה את תמונות החדר האחורי (PC) כדי למנוע ירידה בתמונה בעקבות היווצרות קטרקט. ניתן למנוע היווצרות קטרקט באמצעות שימון תכוף ומריחת 0.3% היפרומלוז או 0.2% w/w ג'ל עיניים קרבומר. עבור הדמיה ממושכת (>10 דקות), שמירה על העכבר חם (באמצעות כרית חימום) גם עוזר.
   1. לאחר הפעלת מערכת ההדמיה OCT, אבטח את עדשת ההדמיה הנכונה והתאם את מיקום זרוע הייחוס לפי הצורך.
   2. פתח את תוכנת ההדמיה, צור את מזהה העכבר הייחודי והתחל בהדמיה בהתאם לפרוטוקול היצרן של OCT.
   3. באמצעות האפשרות Free Run עם פרוטוקול הסריקה המהירה, מקם את העין עם עצב הראייה במרכז תמונות החדר האחורי או את קודקוד הקרנית על תמונות החדר הקדמי.
      הערה: טבלה 1 מכילה פרמטרים של פרוטוקול הדמיה עבור שתי מערכות הדמיה מסחריות של בעלי חיים קטנים. עיין בטבלת החומרים לקבלת מפרט המוצר.
   4. להדמיית החדר האחורי, קרבו את ה-OCT לפני השטח של העין. יש לנקוט משנה זהירות כדי להימנע ממגע של פני השטח של העדשה עם העין.
   5. לאחר מיקום נכון של העין, עצור את הסריקה המהירה, בחר את פרוטוקול סריקת עוצמת הקול והפעל את הסריקה באמצעות האפשרות כוון.
   6. לתמונות מקטע אחורי, התאימו עד שעצב הראייה ממורכז בתמונת היישור האופקי B-Scan והרשתית מיושרת עם ציר היישור האנכי
   7. לתמונות מקטע קדמי, התאימו את המיקום למרכז קודקוד הקרנית הן בתמונת היישור האופקי של B-Scan והן בתמונת היישור האנכי של B-Scan. נוכחותו של חפץ השתקפות בשתי התמונות תאשר יישור תקין. לאחר מכן הזיזו את התמונה האופקית מספיק כדי להסיר את לכלוץ ההשתקפות. עיין באיור 2.
   8. לחץ על Snapshot כדי ללכוד את תמונת סריקת עוצמת הקול ולאחר מכן לחץ על שמור.
   9. לאחר מכן, קבל את ממוצע סריקת הקו המרכזי. פתח את פרוטוקול הסריקה ולחץ על Aim ואחריו Snapshot. לחץ לחיצה ימנית על אותו לוח ולאחר מכן לחץ על ממוצע.
   10. חזור על שלבים 5.2.1-5.2.9 עבור כל עין עם שתי העדשות.
   11. לאחר איסוף כל התמונות, הסר את העכבר מהקלטת וספק הגנה על הקרנית במהלך ההתאוששות כמפורט בשלבים 4.3.11-4.3.13.

6. ניקוד דלקת לפי OCT

1. ציון תמונות OCT בעזרת ציונים רעולי פנים למצב הטיפול.
   הערה: עבור PMU במודל העכבר, מומלצת שיטת הניקוד המסופקת בטבלה 2.
2. אם התקבלו גם תמונות של החדר הקדמי (AC) וגם של החדר האחורי (PC), שלבו את הציונים האלה כדי לקבל את הציון הסופי עבור כל עין.
   הערה: דלקת בחדר הקדמי נפתרת לפני דלקת החדר האחורי.

טבלה 1: פרמטרי סריקה. (A) פרמטרים של סריקת OCT. (B) פרמטרים של סריקת OCT פונדוס/רשתית

א
תא קדמי של עכבר	סריקה מהירה	סריקת עוצמת קול	סריקה ליניארית
אורך X רוחב	4.0 מ"מ x 4.0 מ"מ	3.6 מ"מ × 3.6 מ"מ	3.6 מ"מ
פינה	0	90	90
A-סריקה/B-Scan	800	1000	1000
# סריקות B	50	400	1
מסגרות/ סריקת B	1	3	20
תא אחורי של העכבר	סריקה מהירה	סריקת עוצמת קול	סריקה ליניארית
אורך X רוחב	1.6 מ"מ × 1.6 מ"מ	1.6 מ"מ × 1.6 מ"מ	1.6 מ"מ
פינה	0	0	0
A-סריקה/B-Scan	800	1000	1000
# סריקות B	50	200	1
מסגרות/ סריקת B	1	3	20
ב
תא אחורי של העכבר	סריקת עוצמת קול	סריקה ליניארית
אורך X רוחב	0.9 מ"מ × 0.9 מ"מ	1.8 מ"מ
פינה	0	כל (בדרך כלל 0 או 90)
A-סריקה/B-Scan	1024	1024
# סריקות B	512	1
מסגרות/ סריקת B	1	30

טבלה 2: קריטריוני ציון OCT של PMU: תמונות OCT מנוקדות בהתאם לקריטריונים המפורטים בטבלה. ציוני AC ו- PC מתווספים כדי לקבל את הציון הסופי של העין. במקרים שבהם לא הושגה ראייה ברורה של העין, הוקצה ציון של NA לתמונות, ואלה לא נכללו במחקר.

	OCT תיאורי ציון
הציון	תא קדמי	תא אחורי
נה	אין נוף מעבר לקרנית הקדמית	אין מבט על הקטע האחורי
0	ללא דלקת	ללא דלקת
0.5	1-5 תאים במימית	תאים מעטים התופסים פחות מ -10% משטח הזגוגית
	או בצקת בקרנית	ללא חדירות תת-רשתיות או תוך-רשתיות או הפרעה בארכיטקטורה הרשתית
1	6-20 תאים במימית	תאים מפוזרים (ללא גושים צפופים) תופסים בין 10% ל -50% מאזור הזגוגית.
	או שכבה בודדת של תאים על קפסולת העדשה הקדמית	ללא חדירות תת-רשתיות או תוך-רשתיות או הפרעה בארכיטקטורה הרשתית
2	20–100 תאים במימית	תאים מפוזרים (ללא גושים צפופים) התופסים > 50% מאזור הזגוגית
	או פחות מ-20 תאים ונוכחות היפופיון	ללא חדירות תת-רשתיות או תוך-רשתיות או הפרעה בארכיטקטורה הרשתית
3	20–100 תאים במימית	תאים מפוזרים השווים לכיתות 2 ו-1
	והיפופיון או קרום אישונים	ולפחות אטימות זגוגית צפופה אחת התופסת 10%-20% משטח הזגוגית או נוכחות תאי זגוגית השווים לדרגה 2 ונדירות (≤ 2) אטימות תת-רשתית או תוך-רשתית
4	כל מספר של תאים מימיים	אטימות זגוגית צפופה תופסת >-20% משטח הזגוגית.
	והיפופיון גדול וקרום אישונים או אובדן מבנה קדמי עקב דלקת חמורה	או תאי זגוגית מפוזרים עם אטימות תת-רשתית או תוך-רשתית גדולה

תוצאות

איור 1: הגדרת הזרקה תוך ויטריאלית של עכבר. ההזרקה התוך-ויטריאלית מתבצעת על עין העכבר באמצעות (A) בקר משאבת מזרק זעיר המחובר ל-(B) המיקרו-משאבה ו-(C) מזרק הזרקה. המזרק נטען ומורכב על המיקרו-משאבה (D). ראש העכבר ממוקם באמצעות מוטות אוזניים (E) כדי להבטיח יציבות ועקביות במהלך הליך ההזרקה התוך-ויטריאלי. (F

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
AK-FLUOR	Akorn Pharmaceuticals, IL, ארה"ב (ארצות הברית)		10% נתרן פלואורסצאין 100 מ"ג/מ"ל בבקבוקון 5 מ"ל
אנסד	Akorn Animal Health, אילינוי, ארה"ב (ארצות הברית)	NDC 59399-110-20	קסילזין 20 מ"ג/מ"ל
בטדין 5% תמיסת הכנה סטרילית לעיניים	אלקון, טקסס, ארה"ב (ארצות הברית)	8007-1
מחטי גלישה מדויקות B-D -25 גרם	בקטון, דיקינסון ושות', ניו ג'רזי, ארה"ב	305122
B-D מחט גלישה מדויקת -30-G	בקטון, דיקינסון ושות', ניו ג'רזי, ארה"ב	305106
אג"ח MAX, בונד Rx	Leica Biosystems, אילינוי, ארה"ב		מערכת צביעה אוטומטית של IHC
משחת כלוראמפניקול	מרטינדייל פארמה, רומפורד, בריטניה		1% עם כלוראמפניקול
EG1150H	Leica Biosystems, אילינוי, ארה"ב		שיבוץ רקמות
Envisu R2300	ביופטיגן/לייקה		מכונת OCT
האדג'ובנט הלא שלם של פרוינד	BD Difco, NJ, ארה"ב (ארצות הברית)	263910
משחת עיניים סיכה GenTeal	אלקון, טקסס, ארה"ב (ארצות הברית)	---
ג'ל עיניים סיכה GenTeal	אלקון, טקסס, ארה"ב (ארצות הברית)	---
H37Ra תמצית מיקובקטריה ליופילית	BD Difco, NJ, ארה"ב (ארצות הברית)	231141
המילטון RN מחט (33/12/2)S	המילטון, רינו, נבדה	7803-05(33/12/2)	33 גרם
מזרק המילטון	המילטון, רינו, נבדה	CAL7633-01	5 מיקרוליטר
מחט אינסולין	Exel International, ארצות הברית	26029	1 מ"ל
איזופלורן
קטאסט	Zoetis, ארצות הברית	377341	קטמין הידרוכלוריד 100 מ"ג/מ"ל
משאבת מזרק מיקרו-הזרקה ו-Micro4Controller	World Precision Instruments, פלורידה, ארה"ב (ארצות הברית)	UMP3
מיקרון IV	מעבדות המחקר של פיניקס, פלזנטון, קליפורניה		מכונת הדמיה חלופית/OCT
מזרק ננופיל 10 μL	World Precision Instruments, פלורידה, ארה"ב (ארצות הברית)	ננופיל
ערכת הזרקה תוך עינית ננופיל	World Precision Instruments, פלורידה, ארה"ב (ארצות הברית)	איו-קיט
אולימפוס SZX10	אולימפוס		היקף דיסקציה
PBS	גיבקו	14190
פנילפרין הידרוכלוריד תמיסה אופתלמית USP 2.5% סטרילי 15 מ"ל	Akorn Pharmaceuticals, IL, ארה"ב (ארצות הברית)	17478020115
RM2255	Leica Biosystems, אילינוי, ארה"ב		חתך רקמות
מזרק שחפת	בקטון, דיקינסון ושות', ניו ג'רזי, ארה"ב	309602	1 מ"ל
טטרקאין 0.5%	אלקון, טקסס, ארה"ב (ארצות הברית)	1041544
סדרת Tissue Tek VIP	Sakura Finetek ארה"ב, Inc., CA.		עיבוד רקמות היסטולוגיה
טרופיקמיד 1%	Chauvin Pharmaceuticals, רומפורד, בריטניה		מינימום
טיילנול	Johnson & Johnson Consumer Inc, פנסילבניה, ארה"ב (ארצות הברית)	NDC 50580-614-01	פרצטמול
ויסקוטרים	נוברטיס פרמצבטיקה, קמברלי, בריטניה		ג'ל עיניים Carbomer 0.2% w/w