הליך חיתוך זנב עכבר לאיסוף דם היקפי ובידוד פלזמה

תקציר

מקור: Coats, J. S. et al., ביטוי של ציטוקין אקסוגני ב- Xenografts שמקורם במטופל באמצעות הזרקה עם קו תאי סטרומה מומרים ציטוקינים. J. Vis. Exp. (2017)

בסרטון זה אנו מדגימים הליך חיתוך זנב במודל עכבר לאיסוף דם היקפי. הדם שנאסף נתון לאחר מכן לצנטריפוגה לפלזמה נפרדת, אשר יכולה לשמש לניסויים נוספים.

פרוטוקול

כל ההליכים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הביקורת הווטרינרית JoVE.

1. איסוף דם סדרתי וניטור פלזמה עבור ציטוקין אנושי אקסוגני בעכברים

1. איסוף דם באמצעות חיתוך זנב
   1. יש לחטא את מכסה המנוע של הבטיחות הביולוגית ולהרכיב את משנן העכבר, מספריים וכלים/אספקה אחרים לצורך ההליך.
   2. הנח את העכבר במשענת וחבר את הצינור כדי למזער את תנועת העכבר.
   3. לחטא את הזנב ואת מספריים כירורגיים עם אלכוהול איזופרופיל. החל קרם הרדמה מקומי על הזנב.
   4. באמצעות מספריים כירורגיים חדים מאוד לחתוך על 0.5 - 1 מ"מ של קצה הזנב של העכבר. לאסוף כ 80 μL של דם היקפי באמצעות צינורות נימים heparinized.
      הערה: אם הדם ייאסף בשיטה זו יותר משש פעמים, הסרת הזנב צריכה להיות שמרנית ביחס לכמות הזנב שהוסר. ככל שהצליפות מתקדמות במעלה הזנב הקוטר גדל, הוא מדמם מהר יותר, והריפוי לוקח זמן רב יותר.

2. הפרדת פלזמה

1. להעביר את הדם באמצעות מזרק נורה (כדי לגרש אותו מן צינורות נימי) לתוך מסומן K₂EDTA microtainer צינור; הפוך 20 פעמים כדי למנוע קרישה.
   הערה: בדרך כלל, קרישת הדם מפטמת הזנב מהירה. עם זאת, אם הדימום נמשך יותר מ ~ 2 דקות להשתמש עיפרון / אבקה styptic כדי לסייע קרישה.
2. צנטריפוגות איסוף דם צינורות על פי הוראות היצרן aliquot את הפלזמה לאחסון (-20 ° C) עד מוכן לניתוח נוסף.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
משדר ננו מושתל לבעלי חיים עם קנולה	טרובן	ID-100B(1.25)
קרם הרדמה לידוקאין EMLA (להשיג על ידי presciption באמצעות מתקן לטיפול בבעלי חיים)	הקדשה	הקדשה
מזרק אינסולין BD 1/2 סמ"ק LO-DOSE U-100 28G1/2	ב.ד.	#329461
צינורות מיקרוטיינר BD עם K2EDTA	ב.ד.	#365974
צנטריפוגה	בקמן קולטר	אלגרה X-15R
צינורות נימים FisherBrand (Heparinized)	פישר סיינטיפיק	22-260-950
המוציטומטר	פישר	02-671-6
מנתח MACSQuant 10	Miltenyi ביוטק	130-096-343
עכבר פאי כלוב	Braintree Scientific, Inc.	MPC-1
מעצור מאיר זנב עכבר	Braintree Scientific, Inc.	MTI STD
משתיל אחיזת אקדח	טרובן	IM-300(1.25)
"עכברי NSG" הנהן. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, זכר או נקבה, גיל 6 – 8 שבועות	עכברי JAX	# 005557