הדמיית פאזה כמותית תלת מימדית לאפיון תת-סוגים של לימפוציטים

Abstract

מקור: Yoon, J. et al. זיהוי ללא תווית של תת-סוגים של לימפוציטים באמצעות דימות פאזה כמותי תלת מימדי ולמידת מכונה. J. Vis. Exp.(2018)

סרטון זה מדגים זיהוי ללא תווית של מורפולוגיה וביוכימיה של לימפוציטים באמצעות דימות פאזה כמותי תלת-ממדי. טכניקה זו מאפשרת ניתוח מעמיק של לימפוציטים, חשיפת המבנים הפנימיים שלהם ואת המאפיינים ללא צורך בהליכי תיוג.

Protocol

1. ציטומטריית זרימה ומיון תת-סוגים של לימפוציטים

הערה: מיון לימפוציטים בהתאם לסוג התא חיוני לביסוס תוויות סוג התא של אמת קרקעית (כלומר, נכונה) כדי לאמן ולבדוק מסווג סוג תא בלמידה מפוקחת. ציטומטריית זרימה, שיטת תקן זהב, משמשת לזיהוי והפרדה של לימפוציטים.

1. צור תערובת של נוגדנים לצביעת סמן פני השטח ב- 100 μL של RPMI-1640 בינוני טרי [עם 10% FBS, 0.1 מיקרוגרם של CD3e (17A2), CD8a (53-6.7), CD19 (1D3), CD45R (B220, RA3-6B2) ו- NK1.1 (PK136)] ו- 0.25 מיקרוגרם של נוגדני CD4 (GK1.5) כדי להתמקד בלימפוציטים מסוג B, CD4⁺ T ו- CD8⁺ T.
2. הוסף 100 μL של תערובת נוגדנים להשעיית התא.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ציטומטריית זרימה	BD Biosciences	אריה II או III
תא הדמיה	Tomocube, Inc.	טומודיש
הולוטומוגרפיה	Tomocube, Inc	HT-1H
תוכנת הדמיה הולוטומוגרפית	Tomocube, Inc.	TomoStudio
תוכנה לעיבוד תמונה	מת'וורקס	Matlab R2017b
צינור צנטריפוגה חרוטי בז	תרמופישר סיינטיפיק	14-959-53א	15 מ"ל
מלח חוצץ פוספט	סיגמא-אולדריץ'	806544-500 מ"ל
חיץ שוכב אמוניום-כלוריד-אשלגן	תרמופישר סיינטיפיק	A1049201
RPMI-1640 בינוני	סיגמא-אולדריץ'	₪220
סרום בקר עוברי	תרמופישר סיינטיפיק	10438018