הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
940 צפיות
⸱
8 ביולי 2025
מקור: Thrikawala, S., et al. זיהום של זחלי דגי זברה בנבגי אספרגילוס לניתוח אינטראקציות פונדקאי-פתוגן. J. Vis. Exp. (2020).
סרטון זה מדגים שיטה לכימות זיהום פטרייתי בזחלי דגי זברה. נבגי פטריות מוזרקים במיקרו לחדר המוח האחורי של הזחל, והזחלים מודגרים כדי לאפשר התפתחות זיהום. הזחלים הנגועים נקצרים בפרקי זמן מוגדרים, והתקדמות ההדבקה מוערכת על ידי ספירת יחידות יוצרות מושבות.
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. הכנת נבגי אספרגילוס להזרקה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מלקחיים Dumont #5 | רובוז כלי ניתוח ושות' | RS-5045 | |
| רטיקל עינית | עולם המיקרוסקופ | RETR10 | לכיול מחטים, המשמש בסטריאומיקרוסקופ |
| הגדרת מיקרו-מזרק: יחידת לחץ גב | מכשור מדעי יישומי | BPU | |
| מתג רגליים | מכשור מדעי יישומי | FTSW | |
| ערכת מחזיק מיקרו פיפט | מכשור מדעי יישומי | אם-פיפ | |
| מזרק לחץ | מכשור מדעי יישומי | MPPI-3 | |
| הגדרת מיקרומניפולטור: מיקרומניפולטור | Narashige (טריטק) | M-152 | |
| מעמד וצלחת מגנטיים | טריטק | MINJ-HBMB | |
| מושך מחטים | סאטר אינסטרומנט | P-97 | |
| סטריאומיקרוסקופ | ניקון | SMZ-745 | |
| Tissuelyser II | קיאגן | 85300 | כדי הומוגניזציה של הזחלים |
| חומר | |||
| אגרוז | פישר | BP160-500 | |
| מלח נתרן אמפיצילין | פישר | AAJ6380706 | |
| BSA, חלק V | VWR | AAJ65855-22 | |
| קנמיצין סולפט | פישר | AAJ1792406 | |
| מפזרי L | פישר | 14,665,230 | |
| מחטים מיקרוקפילריות (ללא חוט להט) | מכשירים מדויקים בעולם (WPI) | TW100-3 | |
| קצוות צינור Microloader | VWR | 89009-310 | כדי לטעון את המחט עם השעיה Aspergillus |
| Miracloth | VWR | EM475855-1R | כדי לסנן את מתלה אספרגילוס |
| N-phenylthiourea | פישר | AAL0669009 | למניעת פיגמנטציה |
| פנול אדום, תמיסה 1% | פישר | 57254 | |
| טריקאין (אתיל 3-אמינובנזואט, מלח חומצה מתאן-סולפונית) | פישר | AC118000500 | כדי להרדים זחלים |
| טווין-20 | פישר | BP337-500 | |
| מדיה ופתרונות | רכיבים/מתכון | ||
| מדיית E3: 60x E3 | 17.2 גרם NaCl, 0.76 גרם KCl, 2.9 גרם CaCl2, 4.9 גרם MgSO4 · 7H2O, עד 1 ליטר עם גובה2O | ||
| 1x E3 | 16.7 מ"ל 60x מלאי, 430 ul 0.05 M NaOH, עד 1 ליטר עם גובה2O (אופציונלי: + 3 מ"ל 0.01% מתילן כחול) | ||
| תמיסת מלאי טריקאין | 2 גרם טריקאין, 5 גרם Na2HPO4 · 7H2O, 4.2 מ"ל 60X E3, עד 500 מ"ל עם H2O, pH עד 7.0-7.5 עם NaOH | ||
| אגר מדיה מינימלית גלוקוז (GMM): אגר GMM | 10 גרם גלוקוז (דקסטרוז), 50 מ"ל 20x מלחי ניטראט, 1 מ"ל TE, ל 1 L עם H2O, pH עד 6.5 עם NaOH, + 16 גרם אגר, autoclave | ||
| 20x מלחי ניטראט | 120 גרם NaNO3, 10.4 גרם KCl, 10.4 גרם, MgSO4 · 7H2O, 30.4 גרם, KH2PO4, עד 1 L עם H2O, autoclave | ||
| יסודות קורט (TE) | 2.20 גרם ZnSO4 · 7H2O, 1.10 גרם H3BO3, 0.50 גרם MnCl2 · 4H2O, 0.16 גרם FeSO4 · 7H2O, 0.16 גרם CoCl2 · 6H2O, 0.16 גרם CuSO4 · 5H2O, 0.11 גרם (NH4)6Mo7O24 · 4H2O, 5.00 גרם Na2EDTA, עד 100 מ"ל עם H2O, להמיס תוך ערבוב לילה, autoclave |
