הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
1K צפיות
⸱
8 ביולי 2025
מקור: Augustine, S. A. J., et al. פיתוח נוגדנים מרובים ברוק Immunoassay כדי למדוד את החשיפה האנושית לפתוגנים סביבתיים. J. Vis. Exp. (2016).
סרטון זה מדגים טכניקת בדיקה חיסונית מרובת חרוזים לזיהוי בו זמנית של נוגדנים לפתוגנים סביבתיים מרובים ברוק האנושי. חרוזים פלואורסצנטיים הוצמדו לאנטיגנים מפתוגנים שונים, שנלכדו באמצעות נוגדנים בדגימת הרוק האנושית. לאחר תיוג הנוגדנים באמצעות כתב פלואורסצנטי, החרוזים נותחו באמצעות ציטומטריית זרימה כדי להעריך את נוכחותם של נוגדנים ספציפיים לפתוגן שונים ברוק.
1. צימוד חרוזים
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| ציוד ותוכנה | |||
| מיקרוצנטריפוגה | חברת תרמו-אלקטרון | 75002446 | משמש לדגימות צנטריפוגות |
| מערבול מיקסר | VWR | G560 | משמש לערבוב דוגמאות |
| סוניק (מיני) | פישר סיינטיפיק | 15-337-22 | משמש להפרדת חרוזים |
| Pipettors P10, P20, P100, P1000, 8 ch. | קאפ | מגוון | |
| סעפת ואקום מרובת מסכים | מיליפור | MSVMHTS00 | משמש בשלבי שטיפה להסרת סופרנאטנט |
| מיקרושייקר | VWR | 12620-926 | משמש להתסיס חרוזים במהלך הדגירות |
| מדף צינור (1.5 מ"ל ו-0.5 מ"ל) (מגוון) | VWR | 30128-346 | |
| סולם שקילה | מטלר או אחר | משמש למדידת ריאגנטים לשטיפה להכנת חוצצים | |
| מיקסר לדוגמה Dynabead | Invitrogen | 947-01 | משמש במהלך שלב הדגירה של הצימוד |
| MatLab (R2014b) | The MathWorks, Inc. | משמש לניתוח נתוני תגובת נוגדנים | |
| Microsoft Excel 2014 | Microsoft Corporation | משמש לניתוח נתוני תגובת נוגדנים | |
| Luminex Analyzer עם תוכנת xPonent 3.1 | חברת לומינקס | LX200-XPON3.1 | מכשיר ותוכנה המשמשים להפעלת בדיקה |
| אנטיגנים | |||
| GI.1 Norwalk וירוס : p-particle | שי ג'יאנג (CCHMC)* | נה | * בית החולים לילדים בסינסינטי. קונק סופי. 5 מיקרוגרם. |
| GII.4 Norovirus VA387 : p-particle | שי ג'יאנג (CCHMC)* | נה | * בית החולים לילדים בסינסינטי. קונק סופי. 5 מיקרוגרם. |
| וירוס הפטיטיס A : כיתה II להתרכז מתרבית תאים | מרידיאן מדעי החיים | 8505 | אנטיגן מצומד ב 100 מיקרוגרם |
| הליקובקטר פילורי : ליזט | מרידיאן מדעי החיים | ₪1401 | אנטיגן מצומד ב 25 מיקרוגרם |
| Toxoplasma gondii : רקומביננטי p30 (SAG1) | מרידיאן מדעי החיים | ₪4426 | אנטיגן מצומד ב 25 מיקרוגרם |
| קמפילובקטר ג'ג'וני : חום הרג תאים שלמים | KPL | 50-92-93 | אנטיגן מצומד ב 50 מיקרוגרם |
| נוגדנים ראשוניים | |||
| שרקן גינאה אנטי-נורו-וירוס | (CCHMC)* | נה | משמש לאישור צימוד |
| עכבר נגד הפטיטיס A IgG | מרידיאן מדעי החיים | C65885M | משמש לאישור צימוד |
| עכבר נגד הפטיטיס A IgG | מרידיאן מדעי החיים | C65885M | משמש לאישור צימוד |
| נוגדן מטוהר BacTraceAffinity להליקובקטר פילורי | KPL | 01-93-94 | משמש לאישור צימוד |
| pAb עיזים ל Toxoplasma gondii | אבקאם | AB23507 | משמש לאישור צימוד |
| BacTrace מינים אנטי-קמפילובקטר של עזים | KPL | 01-92-93 | משמש לאישור צימוד |
| נוגדנים משניים | |||
| Biotin-SP-מצומד AffiniPure Donkey נגד עיזים IgG (H+L) | ג'קסון | 705-065-149 | משמש לאישור צימוד |
| ארנב Biotinylated נגד עיזים IgG (H+L) | KPL | 16-13-06 | משמש לאישור צימוד |
| IgG נגד עכבר עז Biotinylated (H+L) | KPL | 16-18-06 | משמש לאישור צימוד |
| זיקה נוגדן מטוהר ביוטין שכותרתו עז נגד ארנב IgG (H+L) | KPL | 176-1506 | משמש לאישור צימוד |
| זיקה נוגדן מטוהר ביוטין שכותרתו IgG אנטי-אנושי עז(γ) | KPL | 16-10-02 | משמש עבור Immunoassay רוק |
| חומרים מתכלים | |||
| 1.5 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגות קופולימר | ארה"ב סיינטיפיק | 1415-2500 | משמש צינורות מיקרוצנטריפוגות קשירה נמוכה |
| 10 μL מילוי קצה פיפטה | ביו-ונצ'רס | 5030050ג | |
| 200 μL מילוי קצה פיפטה | ביו-ונצ'רס | 5030080ג | |
| 1000 μL מילוי קצה פיפטה | ביו-ונצ'רס | 5130140ג | |
| רדיד אלומיניום | ספקים שונים | משומש לשמור חרוזים בחושך במהלך הדגירות | |
| צלחות באר עמוקה | VWR | 40002-009 | משמש לדילול דגימות רוק |
| לוחות סינון מרובי מסכים | מיליפור | MABVN1250 | משמש להפעלת בדיקות |
| מערכת איסוף רוק של Oracol | Malvern פיתוחים רפואיים מוגבלת | משמש לאיסוף רוק | |
| ריאגנטים | |||
| מיקרוספרות קרבוקסיליות (חרוזים) | חברת לומינקס | תלוי בערכת חרוזים | אנטיגנים מצומדים למיקרוספרות |
| EDC (1-אתיל-3-[3dimethylaminopropyl] carbodiimide hydrochloride) | פירס | 77149 או 22980 | משמש בהפעלת חרוזים |
| Sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide) | פירס | 24510 | משמש בהפעלת חרוזים |
| סטפטווידין-R-פיקואריתרין (1 מ"ג/מ"ל) | בדיקות מולקולריות | S-866 | משמש ככתב |
| MES (2-[N-Morpholino]חומצה ethanesulfonic) | סיגמא | M-2933 | משמש לצימוד |
| Tween-20 (Polyoxyethylenesorbitan monolaurate) | סיגמא | P-9416 | משמש במאגר כביסה להסרת כריכה לא ספציפית |
| מאגרי חלבון | |||
| PBS-TBN חסימה/מאגר אחסון (PBS, 0.1% BSA, 0.02% Tween-20, 0.05% Azide, pH 7.4)** | יש לסנן, לעקר ולאחסן בטמפרטורה של 4°C | ||
| PBS, pH 7.4 | סיגמא | P-3813 | 138 mM NaCl, 2.7 mM KCl |
| BSA | סיגמא | A-7888 | 0.1% (עם V/V) |
| טווין-20 | סיגמא | P-9416 | 0.2% (V/V) |
| נתרן אזיד (0.05% אזיד)** | סיגמא | S-8032 | **זהירות: נתרן אזיד הוא רעיל מאוד. יש להימנע ממגע עם העור והעיניים. לבשו ציוד הגנה אישי מתאים. יש להשליך בהתאם לחוקים החלים. |
| MES/ מאגר צימוד (0.05 M MES, pH 5.0) | |||
| MES (2-[N-Morpholino]חומצה ethanesulfonic) | סיגמא | S-3139 | |
| 5 N NaOH | פישר | SS256-500 | |
| מאגר Assay (PBS, 1% BSA, pH 7.4) | יש לסנן, לעקר ולאחסן בטמפרטורה של 4°C | ||
| PBS, 1% BSA, pH 7.4 | סיגמא | P-3688 | 138 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1% BSA |
| מאגר הפעלה (0.1 מטר NaH2PO4, pH 6.2) | יש לסנן, לעקר ולאחסן בטמפרטורה של 4°C | ||
| NaH2PO4 (נתרן פוספט, מונובייסיק נטול מים) | סיגמא | S-3139 | 0.1M NaH2PO4 |
| 5 N NaOH | פישר | SS256-500 | |
| חיץ כביסה (PBS, 0.05% Tween-20, pH 7.4) | יש לסנן, לעקר ולאחסן בטמפרטורה של 4°C | ||
| PBS, 0.05% טווין-20, pH 7.4 | סיגמא | P-3563 | 138 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 0.05% TWEEN |
