זיהוי זיהום חיידקי באמצעות ננו-חיישנים מגנטו-פלואורסצנטיים

תקציר

מקור: Shelby, T., Sulthana, S., McAfee, J., Banerjee, T., Santra, S. Foodborne Pathogen Screening באמצעות ננו-חיישן מגנטו-פלואורסצנטי: זיהוי מהיר של E. coli O157:H7. J. Vis. Exp. (2017).

סרטון זה מדגים טכניקה לזיהוי מזהמים חיידקיים בדגימות מזון ומים באמצעות ננו-חיישנים. חיידקי המטרה הפתוגניים מזוהים באמצעות שילוב של הרפיה מגנטית ושיטות פליטה פלואורסצנטיות.

פרוטוקול

1. זיהוי מהיר של E. coli O157:H7 באמצעות MFnS

1. ספייק פתרונות PBS שונים (1X, pH 7.4, 300 μL) עם כמויות הולכות וגדלות של מלאי ^10-6 חיידקים, וכתוצאה מכך CFU נע בין 1-100. הוסף כמות עקבית של MFnS (100 μL) לפתרונות אלה.
2. צור פתרון בסיסי אחד המכיל PBS בלבד (1X, pH 7.4, 300 μL) ו- MFnS (100 μL).
3. לדגור על תמיסות במשך 30 דקות ב 37 ° C ולאחר מכן לאפשר להם להתקרר לטמפרטורת החדר.
4. העבר תמיסות בודדות למד-הרפיה המגנטי (0.47 טסלה) ורשום שינויים בזמני הרפיה (T2) ביחס ליחידות ה-CFUs בכל תמיסה.
   1. כדי לתעד שינויים בערכי T2, התחל במדידת ערך T2 של הפתרון הבסיסי המכיל PBS ו- MFnS בלבד.
      1. מקם את התמיסה במד הרפיה המגנטי. פתח את התוכנה המתאימה, בחר את ההגדרה "הרפיה T2" ולחץ על "מדידה".
      2. לאחר איסוף קו הבסיס T2, מדדו את ערכי T2 של התמיסות הנוספות שהודבקו בריכוזים שונים של חיידקים.
         הערה: השינוי ב- T2 שווה ערך ל- T2 הבסיסי שהופחת מ- T2 הקוצני.
5. הסר דגימות מן relaxometer מגנטי צנטריפוגה את הצינורות ב 2880 x גרם במשך 10 דקות.
6. דקנט את הסופרנאטנט והשהה מחדש כדורי חיידקים ב 100 מיקרוליטר של PBS (1X, pH 7.4).
7. הוסף 80 μL מכל מתלה לצלחת בעלת 96 בארות ורשום עוצמות פלואורסצנטיות ב- 595 nm.
   הערה: ניתן לחזור על הבדיקה באמצעות ממסים שונים, כולל מי אגם, חלב ואחרים, כמתואר בסעיף התוצאות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ברזל כלוריד טטרהידראט	פישר סיינטיפיק	I90-500
ברזל כלוריד הקסהידראט	פישר סיינטיפיק	I88-500
אמוניום הידרוקסיד	פישר סיינטיפיק	A669S-500
חומצה הידרוכלורית	פישר סיינטיפיק	A144S-500
חומצה פוליאקרילית	סיגמא-אולדריץ'	323667-100 גרם
EDC	תרמופישר סיינטיפיק	22980
NHS	פישר סיינטיפיק	AC157270250
נוגדן אנטי-E. coli O111	טיפול Sera	5310-0352
נוגדן אנטי-E. coli O157:H7 [P3C6	אבקאם	ab75244
כתם DiI	פישר סיינטיפיק	D282
מרק מזין	דיפקו	233000
גלולת E. coli O157:H7 מיובשת בהקפאה	ATCC	700728
Relaxomteter מגנטי	ברוקר	MQ20
זטסייזר	מלוורן	ננו-ZS90
קורא צלחות	טקאן	Infinite M200 PRO
עמוד מגנטי	QuadroMACS	130-090-976
צנטריפוגה	אפנדורף	סדרת 5804
צנטריפוגה (accuSpin Micro 17)	פישר סיינטיפיק	13-100-676
דגם רצפה טלטול אינקובטור	מעבדת של	SSI5
איזון אנליטי	מטלר טולדו	ME104E
מערבל מערבולות דיגיטלי	פישר סיינטיפיק	02-215-370
שייקר נדנדה באוויר הפתוח	פישר סיינטיפיק	02-217-765