טכניקת הדמיה In Vivo PET לגילוי גידולים במודל מורין באמצעות נוגדנים בעלי תווית רדיו

תקציר

מקור: Zeglis, B. M., et al. The Bioconjugation and Radiosynthesis of ⁸⁹Zr-DFO-labeled Antibodies. J. Vis. Exp. (2015).

סרטון זה מדגים טכניקה המערבת רדיואימונוקונצ'וגייט להדמיית in vivo של גידול במודל עכבר. עם הזרקת הרדיואימונוקונצימוד, הנוגדנים של המצומד נקשרים לאנטיגן קרום ספציפי על התאים הסרטניים. הרדיוטרייסר של המצומד פולט פוזיטרונים המקיימים אינטראקציה עם אלקטרונים שכנים כדי לייצר אנרגיה, אשר מזוהה על ידי סורק טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים (PET) כדי ליצור תמונה של הגידול.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. ב-Vivo PET Imaging עם ⁸⁹Zr-DFO-J591

זהירות: שלב זה של הפרוטוקול כולל טיפול ומניפולציה של רדיואקטיביות. לפני ביצוע שלבים אלה, על החוקרים להתייעץ עם מחלקת בטיחות הקרינה של מוסד הבית שלהם. יש לנקוט בכל הצעדים האפשריים כדי למזער את החשיפה לקרינה מייננת.

1. בעכברים עירומים אתימיים זכרים, שותלים תת עורית 5 x 10⁶ קרצינומה של בלוטות הלימפה של תאי סרטן הערמונית (LNCaP) ומאפשרים להם לגדול ל 100-150 מ"מ³ xenograft (3-4 שבועות לאחר החיסון).
2. לדלל את ⁸⁹Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugate לריכוז של 1.0 mCi/ml במי מלח סטריליים 0.9%.
3. הזריקו 200 μl של ⁸⁹Zr-DFO-J591 (DFO = desferrioxamine, J591 = אנטיגן ספציפי לערמונית [PSMA] המכוון לנוגדן) (200 μCi; 7.4 MBq) לווריד הזנב הצידי של העכברים נושאי הקסנוגרפט.
4. בנקודת זמן ההדמיה הרצויה (למשל, 12, 24, 48, 72, 96 או 120 שעות לאחר ההזרקה), מרדימים את העכבר עם איזופלורן: תערובת גז חמצן 2%.
5. הניחו את העכבר על מצע סורק ה-PET של בעלי החיים הקטנים ושמרו על הרדמה במהלך הסריקה באמצעות תערובת גז חמצן איזופלורן 1%. לפני הנחת בעל החיים על מיטת הסורק, יש לוודא את פעולת ההרדמה בשיטת צביטת הבוהן ולמרוח משחה אופתלמית על עיני העכבר כדי למנוע התייבשות במהלך ההרדמה.
6. קבל את נתוני ה- PET עבור העכבר באמצעות סריקה סטטית עם מינימום של 40 מיליון אירועים מקריים באמצעות חלון אנרגיה של 350-700 keV וחלון תזמון צירוף מקרים של 6 nsec.
7. לאחר השלמת רכישת התמונה, אל תשאיר את העכבר ללא השגחה, ואל תניח אותו בכלוב עם עכברים אחרים עד שהוא חזר להכרה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
p-SCN-BN-DFO	מקרוציקליים	B-705	יש לאחסן בטמפרטורה של -80°C
[89Zr]Zr-אוקסלט	שונים, כולל פרקין-אלמר	-	זהירות: חומר רדיואקטיבי