בדיקת מבחנה להערכת השפעת נוגדנים על ביופילם קנדידה טרופיקליס

הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בדיקת מבחנה להערכת השפעת נוגדנים על ביופילם קנדידה טרופיקליס

755 צפיות

⸱

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

מקור: Chandley, P., et al. A Soluble Tetrazolium Based Reduction Assay to Assessment of Antibodies on Candida tropicalis Biofilms. J. Vis. Exp. (2022).

סרטון זה מדגים טכניקה במבחנה לחקר השפעת נוגדנים על ביופילמים פטרייתיים. הפטרייה הפתוגנית Candida tropicalis מפרישה גורם אלים המופרש aspartyl proteinase 2 (Sap2), מה שמקל על היווצרות ביופילם. עם החדרת סרום מומת חום המכיל נוגדנים ספציפיים ל-Sap2 המעכבים את הבשלת הביופילם, נבדקת הכדאיות של התאים הפטרייתיים באמצעות בדיקה כרומוגנית.

פרוטוקול

1. היווצרות ביופילם טרופיקליס

הכינו ביופילמים של קנדידה בלוח מיקרוטיטר פוליסטירן בעל תחתית שטוחה של 96 בארות כפי שתואר קודם לכן (איור 1).
הוסיפו 100 μL של תרבית C. tropicalis (מ-10⁶ תאים/מ"ל, שהוכנו לעיל) לצלחת מיקרוטיטר של 96 בארות באמצעות פיפטה רב-ערוצית (איור 2A). שמור על שתי העמודות האחרונות (11 ו -12) כ"ללא פטרייה פלוס נסיוב" ו"ללא פטרייה וללא סרום" על ידי הימנעות מהוספת תאים פטרייתיים. מלא עמודות 11 ו- 12 ב- 100 μL של Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Morpolinepropanesulfonic acid (MOPS) medium בלבד.
מכסים את צלחת ה....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

figure-results-1
איור 1: הדמיה של ביופילם קנדידה טרופיקליס.(A) הדמיה של ביופילם קנדידה טרופיקליס שנוצר בתחתית לוח מיקרוטיטר בעל 96 בארות לאחר הסרת תווך RPMI, באמצעות מיקרוסקופ הפוך. התמונה צולמה באמצעות מיקרוסקופ ברייטפילד (לא נעשה שימוש בכתם). (B) הדמיה של ביופילם C. tropicalis שנוצר בתחתית לוח מיקרוטיטר בעל 96 בארות לאחר צביעה סגולה קריסטלית. (C

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
15 מ"ל צינורות צנטריפוגות חרוטיות	BD בז	546021
1x PBS	-	מוכן במעבדה	NaCl : 4 גרם KCl : 0.1 גרם Na₂HPO₄: 0.72 גרם KH₂_{ת.ד. 4} : 0.12 גרם מים 500 מ"ל. כוונן את ה- pH ל- 7.4
50 מ"ל צינורות צנטריפוגות חרוטיות	BD בז	546041
צלחות מיקרוטיטר 96 בארות	אנונימי	442404
אינקובטור	כללי
מנדיון	סיגמא	M5625
קורא לוחות Microtiter	כללי
פיפטה רב ערוצית וטיפים	כללי
צלחות פטרי	טרסון	460090
רינגרים לקטט	-	מוכן במעבדה	נתרן כלורי 0.6 גרם נתרן לקטט 0.312 גרם אשלגן כלורי 0.035 גרם סידן כלורי 0.027 גרם מים 100 מ"ל. כוונן ל- pH 7.0
RPMI 1640 MOPS	היימדיה	AT180
XTT	Invitrogen	X6493

תגיות

בדיקת השפעת נוגדי גוף עיכוב Sap2 הפחתת סובסטרט כרומוגני תמיסת XTT Menadione פרוטוקול דילול סרום עיכוב הבשלה של ביופילם הערכת חיוניות פטרייתית טכניקה במעבדה (In Vitro)מדידת בליעה (Absorbance)

בדיקת מבחנה להערכת השפעת נוגדנים על ביופילם קנדידה טרופיקליס