ניתוח מבוסס ציטומטריה של זרימה של הפעלת תאים דנדריטיים באמצעות קומפלקסים חיסוניים

תקציר

מקור: Santana-Magal, N., et al. פרוטוקול בידוד של תאים דנדריטיים שמקורם במונוציטים בעכבר והפעלתם לאחר מכן במבחנה עם קומפלקסים חיסוניים של הגידול.J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מדגים פרוטוקול להערכת ההפעלה של תאים דנדריטיים באמצעות תאי גידול מצופים אימונוגלובולין G (IgG). תאים דנדריטיים מפנימים את תאי הגידול המצופים IgG, מעבדים את האנטיגנים של הגידול ומציגים אותם על פני השטח באמצעות מולקולות MHC-II, יחד עם ביטוי משותף של מולקולת קוסטימולטורית CD86. תאים דנדריטיים אלה עוברים ניתוח של אימונוסטיין ממוקד MHC-II ו-CD86 וניתוח ציטומטריית זרימה כדי לזהות את מצב ההפעלה שלהם.

פרוטוקול

כל ההליכים הכרוכים באיסוף דגימות בוצעו בהתאם להנחיות IRB של המכון.

1. בידוד תאים דנדריטיים הקשורים לגידול

1. במכסה מנוע של זרימה למינרית, יש להסיר גידולים מעכברים שעברו המתת חסד CO₂ ולמקם גידולים במדיום RPMI ללא נסיוב בקר עוברי (FBS).
   הערה: מומלץ מאוד לגלח את העכברים ולרסס אותם באתנול 70% לפני הסרת הגידולים כדי למזער זיהומים פוטנציאליים מהפרווה. ודא כי הגידול אינו עולה על 25 - 40 מ"מ² מאז גידולים גדולים יש פחות תאים דנדריטיים (DC) נוטים להיות שבירים נוטים לעבור מוות תאי. אם יש צורך במספר גדול יותר של DC, ניתן להזריק לכל עכבר תאי גידול במספר אתרים.
2. מתחת למכסה ....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Ficoll-Paque פרימיום	GE-Healthcare	17-5442-02
OptiPrep	טכנולוגיות StemCell	7820
CD45 MicroBeads	מילטני	130-052-301
ערכת בידוד מונוציטים EasySep	טכנולוגיות StemCell	19861
קולגנאז IV	סיגמא	C9697-50MG	בדוק כל מנה עבור אנדוטוקסין
DNase I	סיגמא	DN25-10MG
HBSS	תרמופישר	14025092
פ.ב.ס.	תרמופישר	16140071	בדוק כל מנה עבור אנדוטוקסין
PE-CD11c	ביואגדה	117307
APC-CD11b	ביואגדה	101211
סגול מבריק 650 MHCII	ביואגדה	107641
AF48- CD86	ביואגדה	105017
APC/Cy7-LY-C6	ביואגדה	108423
PE/Cy7-CD15	ביואגדה	135523