הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
1K צפיות
⸱
8 ביולי 2025
מקור: Fang, E. F., et al. In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. elegans, and mice. J. Vis. Exp. (2017).
סרטון זה מדגים בדיקת in vivo לחקר מיטופגיה ב- Caenorhabditis elegans. עם חשיפת הנמטודות לתרופה הגורמת למיטופגיה, המופע של מיטופגיה מוערך על ידי קו-לוקליזציה בין DCT-1, קולטן מיטופגיה על המיטוכונדריה הפגועה, לבין חלבון הממברנה האוטופגוזומלית LGG-1.
1. איתור מיטופגיה ב- C. elegans
הערה: הנמטודה C. elegans מספקת פלטפורמה להערכת מיטופגיה ברמת האורגניזם. ניתן להשתמש בשני זנים כדי לנטר מיטופגיה: (1) רוזלה ממוקדת מיטוכונדריה (mtRosella) או (2) קולטן מיטופגיה DCT-1 מאוחה עם GFP יחד עם סמן אוטופגוזומלי LGG-1 מאוחה עם Discosoma sp. חלבון פלואורסצנטי אדום (DsRed).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מיקרוסקופ קונפוקלי Eclipse TE-2000e | ניקון | #TE-2000e | |
| תוכנת קולוקליזציה | וולוסיטי | #Volocity 6.3 | תוכנה חלופית Zeiss ZEN 2012 |
| תוכנת IN Cell Investigator | GE Healthcare מדעי החיים | #28408974 | |
| מדיום תרבית תאים | תרמופישר | #DMEM–מדיום הנשר המעובד של דולבקו | |
| פניצילין-סטרפטומיצין (10,000 U/mL) | תרמופישר | #15140122 | |
| סרום בקר עוברי | סיגמא-אולדריץ' | #12003C-1000 מ"ל | |
| אינקובטור תרביות תאים | תרמופישר | #Thermo פורמה 3110 CO2 מים אינקובטור | |
| מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי | זיס | Zeiss Axio Imager Z2 | |
| מצלמה | אולימפוס | אולימפוס DP71 | |
| מיקרוסקופ קונפוקלי | זיס | Zeiss Axio Observer Z1 | |
| תוכנת Confocal | זיס | זן 2012 | |
| תוכנה לניתוח תמונות | תמונה J | ניתוח קולוקליזציה וכו' | https://imagej.nih.gov/ij/ |
| תוכנת ניתוח סטטיסטי | GraphPad Software Inc., סן דייגו, ארה"ב | חבילת התוכנה GraphPad Prism | |
| חומר להכנת תולעת | Surepure Chemetals | #4655 | הפיק עשוי 30 מד 90% פלטינה 10% חוט אירידיום |
| IR: N2; לשעבר [pmyo-3 TOMM-20::Rosella] | חקירה מהותית לטברנראקיס נקטריוס | שמור על בעלי חיים טרנסגניים ב 20 ° C | |
| IR: N2; Ex[pdct-1 DCT-1::GFP; pmyo-3 DsRed::LGG-1] | חקירה מהותית לטברנראקיס נקטריוס | ||
| pmyo-3 TOMM-20::Rosella | חקירה מהותית לטברנראקיס נקטריוס | ||
| pdct-1 DCT-1::GFP | חקירה מהותית לטברנראקיס נקטריוס | ||
| pmyo-3 DsRed::LGG-1 | חקירה מהותית לטברנראקיס נקטריוס | ||
| פתרון Paraquat | |||
| מאגר M9 | |||
| חיץ M9-levamisole | |||
| מיקרוסקופ זכוכית שקופיות וכיסויים | פישר סיינטיפיק | #B9992000 | |
| מלקחיים כירורגיים | STERIS בריאות בעלי חיים | 19 חתיכות כלבים ספיי פאק כלכלה | |
| מספריים כירורגיים | STERIS בריאות בעלי חיים | 19 חתיכות כלבים ספיי פאק כלכלה | |
| 1x PBS | תרמופישר | #AM9625 | 10x PBS צריך להיות מדולל 1x PBS באמצעות ddH2O |
| שאכר | פישר סיינטיפיק | #11-676-178 | Thermo Scientific MaxQ HP Tabletop Orbital קטן שייקר פלטפורמה באוויר הפתוח חבילת A |
| 2% כרית אגרוז | |||
| להבי ויברוסליצה | מכשירים מדויקים בעולם | #BLADES-2 | להב בעל קצה יחיד |
| לוח מתכת | MSC | #78803988 | 0.012 אינץ' עבה x 6 אינץ' רוחב x 12 אינץ' אורך, 430 יריעות נירוסטה |
| טריטון X-100 | מחטא | ||
| מתיל ויולוגן דיכלוריד הידרט | סיגמא-אולדריץ' | #856177 | פרקוואט |
| אינקובטור לנמטודות | אקווליטי | אינקובטור לשמירה על 20 מעלות צלזיוס | |
| ניתוח סטריאומיקרוסקופ | אולימפוס | SMZ645 | |
| מיקרוסקופ קונפוקלי | זיס | AxioObserver Z1 | עבור נמטודות (שלב 2) |
| מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי | זיס | AxioImager Z2 | עבור נמטודות (שלב 2) |
| קרוסלינקר UV | וילבר לורמה | ביו-לינק – BLX-E365 | מקור אור UV; 356 ננומטר |
