השפעת אספירין ואיבופרופן על היכולת הפאגוציטית של מקרופאגים

תקציר

סרטון זה מציג שיטה להערכת ההשפעה של אספירין ואיבופרופן, בריכוזים המעכבים המינימליים שלהם, על מקרופאגים פגוציטוזה באמצעות תאים פטרייתיים מוכתמים בצבע פלואורסצנטי רגישים ל- pH. התרופות מעכבות ציקלואוקסיגנאז-2, מפחיתות את היווצרות הפרוסטגלנדינים ומגבירות את הפאגוציטוזה של המקרופאגים, כפי שנצפה באמצעות מדידות פלואורסצנטיות של צבע רגיש ל- pH.

פרוטוקול

1. שיקולי בטיחות

1. על אנשי הצוות להשתמש בציוד מגן אישי (PPE).
2. טפל בפתוגן ובמקרופאגים בארון בטיחות ביולוגי Class II.

2. הכנת מקרופאגים

1. טפחו קו תאי מקרופאג מורין, RAW 264.7, בבקבוק רקמה המכיל 10 מ"ל של Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640) בינוני, בתוספת סטרפטומיצין 20 מ"ג/מ"ל, 2 mM L-גלוטמין, 20 U/mL פניצילין ו-10% סרום בקר עוברי (FBS).
2. הניחו את הבקבוק באינקובטור של 5% פחמן דו-חמצני (CO₂) בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עד להשגת מפגש של 80%.
3. גרדו בעדינות את התאים באמצעות מגרד תאים.
4. מעבירים את התאים המרחפים לצינור צנטריפוג....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אגר	מרק		משמש להכנת צלחות YM
תמצית שמרים	מרק		משמש להכנת צלחות YM
תמצית לתת	מרק		משמש להכנת צלחות YM
פפטון	מרק		משמש להכנת צלחות YM
בסיס חנקן שמרים (YNB)	מעבדות דיפקו		משמש בטיפוח של תאים cryptococcal
גלוקוז	מרק		משמש להכנת צלחות YM
כתם כחול טריפאן	סיגמא-אולדריץ'		כדי למנות תאים חיים ומתים
תמיסת חיץ פוספט (PBS)	סיגמא-אולדריץ'		לשטוף ולדלל תאים
סל"ד- 1640 בינוני	ביוכרום		מצע טיפוח למקרופאגים
סרום בקר עוברי (FBS)	ביוכרום		משמש להשלמת מדיום RPMI-1640
פניצילין/סטרפטומיצין/L-גלוטמין	סיגמא-אולדריץ'		נוסף למדיום RPMI-1640
pHrodo green zymosan כתם	לייף טכנולוגיות		משמש להכתמת תאים מופנמים עקב שינוי ב- pH
חומצה אצטילסליצילית (אספירין)	סיגמא-אולדריץ'		התרופה שעומדת להיבדק
אתנול מוחלט	מרק		משמש להמסת אספירין
איבופרופן	סיגמא-אולדריץ'		תרופה להיבדק
דימתיל סולפוקסיד (DMSO)	מרק		משמש להמסת איבופרופן
לוחות מיקרוטיטר בעלי תחתית שטוחה 96 בארות	גריינר ביו-וואן		משמש ככלי שבתוכו בוצעו תגובות
בקבוק טישו	לאסק		משמש לטיפוח מקרופאגים
צינור צנטריפוגה 15 מ"ל	לאסק		משמש להכלת מקרופאגים
גרוטאות תאים	לאסק		משמש לניתוק מקרופאגים מבקבוק הרקמה
לולאת חיסון	לאסק		משמש כדי לפזר תרבות על צלחת אגר
המוציטומטר	מריאנפילד		כדי לקבוע את ריכוז התא של המקרופאגים
1.5 מ"ל צינורות פלסטיק	מרק		משמש ככלי שבתוכו בוצעו תגובות
EZ Read 800 ספקטרופוטומטר מחקר	ביוכרום		כדי לקרוא את הצפיפות האופטית
Fluoroskan Ascent FL	תרמו-מדעי		כדי למדוד פלואורסצנטיות
חממת CO2	תרמו-פישר		משמש לדגירת המקרופאגים
ארון בטיחות ביולוגי סוג II	אסקו		כדי לעבוד בבטחה עם הפתוגנים מבלי לגרום נזק למשתמש.