כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. משטר הכנה כירורגית, הרדמה ושיכוך כאבים
- הניחו וילון חד פעמי סטרילי (45.7X66 ס"מ) על משטח הניתוח. תפוס בעדינות את העכבר, הזריק קטמין (50 מ"ג / ק"ג) וקסילזין (10 מ"ג / ק"ג) תוך צפקית (i.p) להרדמה, והזריק 0.05 מ"ג / ק"ג buprenorphine תת עורית לשיכוך כאבים.
- יש לוודא את עומק ההרדמה על ידי צביטת אצבע, לגלח את השיער בכל אזור הבטן עם סכין גילוח ולהניח את העכבר על משטח הניתוח הסטרילי מתחת למיקרוסקופ הניתוח בהגדלה של פי 6-10.
2. קציר הטחול של התורם
- לעקר את הבטן עם כרית הכנה אלכוהול, לאבטח את הגפיים עם סרט כירורגי, ולבצע חתך עור אנכי 3-4 ס"מ קו אמצע מן הערווה לתהליך xiphoid עם מספריים.
- משוך את דופן הבטן עם retractors סטרילי עשוי אטבי נייר. הזיזו את המעיים לאגף הימני של הבטן (הצד השמאלי של המנתח) בעזרת צמר גפן סטרילי כדי לחשוף את הטחול. צרוב את וריד הקיבה הקצר המחובר לטחול באמצעות צריבה סטרילית בטמפרטורה נמוכה (איור 1A). הניחו חתיכת גזה סטרילית ספוגה במי מלח בטמפרטורה של 37°C על הטחול כדי לשמור עליו לח (איור 1B).
- הפרידו וגייסו את הווריד הפורטלי מרקמת הלבלב (איור 1C) על-ידי קשירת ענפי הווריד הפורטלי (וריד לבלב עליון ווריד קיבה ימני); הניחו תפר סביב וריד הפורטל, דיסטלי מווריד הטבור (איור 1D).
- הפכו את הטחול לצד ימין כדי לחשוף את אבי העורקים ואת גזע הצליאק עם עורק הטחול (איור 1E). לנתח ולגייס עורק אבי העורקים-צליאק-ספלני על ידי קשירת עורק הכבד ועורק הקיבה; הניחו תפר סביב אבי העורקים פרוקסימלי לעורק הצליאק (איור 1F-G).
- הזריקו 100 יחידות בינלאומיות (IU) של הפרין לתוך הווריד הנבוב התחתון (IVC) כדי להפריד את כל הגוף והמתינו 3 דקות כדי להבטיח שההפרין ישפיע. קשרו את אבי העורקים הפרוקסימלי לעורק הצליאק, עברו את וריד הפורטל, ואז חוררו את כל הגוף באמצעות 10 מ"ל של מי מלח קרים (4°C) (10 מ"ל/20 שניות) מאבי העורקים הבטני הדיסטלי לצליאק (איור 1H).
- לאסוף את שתל הטחול en bloc עם המקטע הקשור אבי העורקים-צליאק-ספלני ואת וריד הפורטל יחד עם קטע של וריד טבור וחלק קטן של רקמת הלבלב. שמור על השתל ב 5 מ"ל של 4 ° C מלוחים לפני ההשתלה. הרדימו את העכבר על ידי נקע צוואר הרחם.
3. השתלת כריתת טחול והשתלת טחול
- הניחו כרית חימום על משטח הניתוח וכוונו את הטמפרטורה ל-37°C. הניחו וילון סטרילי (45.7 ס"מ x 66 ס"מ) על גבי כרית החימום ליצירת משטח כירורגי סטרילי. חזור על שלבים 2.1 ו -2.2 להכנה כירורגית והרדמה. בצע חתך בקו האמצע של 3-4 ס"מ ומשוך את דופן הבטן כמתואר בשלב 2.1 ושלב 2.2.
- בזהירות להזיז את המעי לצד ימין של העכבר עם צמר גפן סטרילי כדי לחשוף את הטחול של הנמען. קשרו את וריד הטחול והעורק והסירו את הטחול.
- בזהירות להעביר את המעי לצד שמאל של העכבר ולכסות את המעיים עם גזה רטובה (ספוג עם סטרילי 37 ° C מלוחים). לנתח ולקשור את הענפים המותניים של אבי העורקים האינפרא כלייתי ו- IVC; הידוק צולב את אבי העורקים האינפרא-כלייתי ואת IVC באמצעות שני מלחציים מיקרו-וסקולריים בקוטר 4 מ"מ.
- הניחו תפר ניילון 11-0 דרך אבי העורקים האינפרא-כלייתי (בעובי מלא) ונסוגו לאחור ליצירת אבי עורקים אליפטי על ידי חתך יחיד עם מיקרומספריים (האורך צריך להתאים לקוטר אבי העורקים התורם, איור 2A). ניקבו את ה-IVC באמצעות מחט של 30 גרם כדי ליצור ארס אליפטי והרחיבו את הפתח לאורך תואם ורידים של פורטל התורם באמצעות מיקרו-מספריים (איור 2A).
- נקה את הדם או קריש הדם intraluminal (באבי העורקים IVC) עם 500 μL של מלוחים heparinized (10 יחידות / מ"ל).
- מקם את שתל הטחול באגף הימני של בטן העכבר המקבל; זהה בזהירות את שרוול אבי העורקים של התורם ואת וריד הפורטל של התורם. לאחר שווידאתם שהכלים אינם מעוותים, כסו את שתל הטחול בגזה ספוגה במי מלח קרים (4 מעלות צלזיוס).
- חברו את שרוול אבי העורקים של התורם לקודקוד הפרוקסימלי והדיסטלי של אבי העורקים של המקבל באמצעות שני תפרי שהייה (תפר ניילון 11-0, כמו להלן) (איור 2B,C). בצעו אנסטומוזה עם 2-3 נשיכות של תפרי ניילון רצופים של 11-0 בין השרוול האאורטלי של התורם לבין אבי העורקים (הקיר הקדמי) של המקבל (איור 2D). הפוך את שתל הטחול לצד שמאל של הנמען; ליצור את האנסטומוזה בין שרוול אבי העורקים של התורם לבין אבי העורקים של המקבל (דופן אחורית) (איור 2E).
- בצעו אנסטומוזה כדי לחבר את הווריד הפורטלי של התורם לדופן האחורית של ה-IVC של הנתרם, באמצעות 4 עד 5 נשיכות של תפרים רציפים בחלק הפנימי של ה-IVC ולאחר מכן סגרו את התפר בצד החיצוני של ה-IVC (איור 2F,G).
- שחררו את מהדקי כלי הדם והשתמשו במקלון צמר גפן סטרילי כדי לדמם טמפונדה עד שצבע הטחול מתאושש (איור 2H).
- סגור את הבטן עם תפר ויקריל סינתטי נספג 5-0 בתבנית רציפה. סגור את שכבת העור בתפר ניילון 5-0 בתבנית קטועה.
הערה: עבור שלבים 3.7-3.8, לחילופין, בצע תחילה אנסטומוזה בין וריד הפורטל של התורם לבין IVC של המקבל (שלב 3.8); לאחר מכן בצע אנסטומוזה בין שרוול אבי העורקים של התורם לבין הקיר האחורי של אבי העורקים של הנתרם, באמצעות 2 עד 3 תפרים רציפים בחלק הפנימי של אבי העורקים וסגור את התפר בצד החיצוני של אבי העורקים.
4. שיקום בעלי חיים
- יש להזריק 1 מ"ל מלח חם תת עורית דרך 4 מיקומים נפרדים (0.25 מ"ל למיקום) לאחר סגירת הבטן.
- שמור את העכבר באינקובטור מבוקר טמפרטורה (30 מעלות צלזיוס) במשך השעות הראשונות לאחר הניתוח, עקוב אחר העכבר עד שהוא חזר להכרה מספקת, ולאחר מכן העבר את העכבר לכלוב נקי חדש עם מזון ומים רגילים, עם כרית חימום (30 מעלות צלזיוס) מתחת לכלוב. שמור את העכבר לאחר הניתוח בכלוב נפרד.
5. טיפול בכאב לאחר ניתוח
- יש להזריק 0.05 מ"ג/ק"ג buprenorphine תת עורית 24 שעות ו 48 שעות לאחר הניתוח כדי לשמור על משטר שיכוך כאבים.
