טיפול בפאגים נגד זיהום Pseudomonas aeruginosa בעוברים של דגי זברה

תקציר

מקור: Cafora, M., et al., A. Phage Therapy Application to Counteract Pseudomonas aeruginosa Infection in Cystic Fibrosis Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (2020)

הסרטון מדגים את טכניקת הטיפול בפאגים המכוונת לזיהום Pseudomonas aeruginosa בעוברים של דגי זברה סיסטיק פיברוזיס. טיפול בפאגים מפחית ביעילות את עומס החיידקים וממתן תגובות חיסוניות מעודדות דלקת בעוברים של דגי זברה CF הנגועים בחיידקים, מה שמוביל לירידה בקטלניות של עוברי CF.

פרוטוקול

1. מיקרו-הזרקה של עוברי דגי זברה עם חיידקים וקוקטייל פאגים

הערה: כדי לבצע זיהום מערכתי, על העובר להיות בעל זרימת דם שמתחילה בדרך כלל לאחר 26 hpf.

1. לאחר 26 hpf, עוברים dechorionate עם תמיסת pronase מוכן על ידי המסת אבקת pronase בתווך E3 בריכוז של 2 מ"ג / מ"ל. מרפטים בעדינות את העוברים כדי לשבור את הכוריון. יש להשליך את הפרונאז/E3 מדיום ולשטוף את הכלי מספר פעמים עם E3 טרי כדי להסיר את כל הפרונאז.
2. מרדימים עוברים של דגי זברה בתווך E3 המכיל טריקאין כ-5 דקות לפני הזרקות.
3. פיפטה את העוברים המורדמים לתוך המסלול מוכן בשלב 1. השתמש בקצה העמסת ג'ל דק כדי לרפד את העוברים במצב רוחבי.
....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
בקטו אגר	ב.ד.	214010
הפוספט של דולבקו חצץ מלוחים PBS	סיגמא-אולדריץ'	D8537
אתיל 3-אמינובנזואט מתאן-סולפונט	סיגמא-אולדריץ'	886-86-2	שם נפוץ טריקאין
Femtojet Micromanipulator	אפנדורף	5247
מחטי מיקרו-הזרקה	מכשיר הרווארד
N-פנילתיאוריאה >=98%	אולדריץ'-P7629	103-85-5
פרונאז	סיגמא-אולדריץ'	9036-06-0
Z-MOLDS מיקרו-הזרקה	מכשירים מדויקים של Word