בדיקת מבחנה לבדיקת אינטרפרונים כמעכבים חזקים של צמיחת נגיף זיקה

תקציר

מקור: Contreras, D. et al., Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons. J. Vis. Exp. (2016)

הסרטון מדגים בדיקת מבחנה לבדיקת אינטרפרונים בעלי פעילות אנטי-ויראלית נגד נגיף הזיקה, פתוגן אנושי. בתוך התא המארח, נגיף הזיקה עובר הכפלה עם הפנמתו, מדביק תאים שכנים ויוצר אזורים מובחנים או רבדים נגיפיים. אינטרפרון מסוג I, הפועל כסוכן אנטי-ויראלי, מעכב את הכפלת הנגיף, ובכך מונע היווצרות של פלאקים נגיפיים בתא המארח monolayer.

פרוטוקול

1. בדיקת ספריית ציטוקינים נגד זיהום בנגיף זיקה

1. זרעו תאי Vero נאיביים בגודל 1X10⁵ תאים לכל באר באמצעות צלחת של 12 בארות. לאחר חיבור התאים (6 שעות לאחר הזריעה), הוסיפו כל ציטוקין ב
   ריכוזים מצוינים בכפילויות ביולוגיות (נפח 2 מ"ל/באר). כלול בקרת רכב (PBS) בלבד.
2. ב 12 שעות לאחר הטיפול, לבצע זיהום ויראלי זיקה (MOI של 0.1 ל 400 μl לכל באר). כלול בארות בקרה שליליות ללא זיהום (דמה).
3. לאחר 4 שעות לאחר ההדבקה, החלף את החיסון הנגיפי במדיה שטופלה בציטוקינים (2 מ"ל). יש לדגור על התאים בטמפרטורה של 37°C למשך 44 שעות נוספות.
4. 48 שעות לאחר ההדבקה, ספרו רבדים נגיפיים באמצעות מיקרוסקופ ניגודיות פאזה וקבלו תמונות מייצגות של תאים נגועים בהגדלה של פי 40 (איור 1).

תוצאות

איור 1: אינטרפרונים מפגינים פעילות נגיפית חזקה נגד זיקה. (A) גרף המציג אפנון של צמיחת נגיפי זיקה על ידי ציטוקינים שונים בהשוואה לזה של בקרת הרכב. ערכים ממוצעים וסטיית תקן מוצגים בתרשים העמודות. אינטרפרונים הראו עיכוב מובהק סטטיסטית של שכפול נגיף זיקה (ערך p <0.05). (B ו-C) תמונות ניגודיות שלב של תאים נגועים בנגיף זיקה עם או בלי טי...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
קו Vero Cell	ATCC	CCL-81
זן ויראלי זיקה PRVABC59	המרכז לבקרת מחלות ומניעתן (CDC)
IL-6	פפרוטק	200-06
IL-1 אלפא	פפרוטק	200-01א
TNF-אלפא	פפרוטק	300-01א
אינטרפרון אלפא A	מערכות מו"פ	11100-1
אינטרפרון בטא	פפרוטק	300-02 לפנה"ס
אינטרפרון גמא	פפרוטק	300-02
צנטריפוגה 5415R	אפנדורף	5415R
צנטריפוגה 5810R	אפנדורף	5810R
מיקרוסקופ Nikon Eclipse Ti Immunofluorescence עם Nikon Intenslight C-HGFI	ניקון