$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. הרדמה וניתוח של בעלי חיים
- שקול והרדים את העכבר עם משטר ההרדמה המאושר שלך מהוועדה המקומית לטיפול בבעלי חיים.
- בצע צביטת זנב או בוהן עם מלקחיים כדי לאשר הרדמה עמוקה לפני הניתוח.
- מקם את העכבר במנגנון סטריאוטקסי וקבע את ראשו.
- יש למרוח משחת עיניים על שתי העיניים כדי לשמור עליהן לחות. עקוב אחר ההנחיות המקומיות שלך לטיפול בבעלי חיים בנוגע לשיכוך כאבים לפני ואחרי הניתוח.
- לגלח את השיער באמצעות קוצץ כירורגי. בצע חתך קטן (12-15 מ"מ) באמצע אזור הניתוח החשוף עם מספריים. בעזרת מלקחיים, משכו בעדינות את הקרקפת מקו האמצע.
- יש להפריד את העור בעדינות ולהסיר שאריות רקמה. נקו את הגולגולת באמצעות ניצני כותנה מצופים מי חמצן.
- קדחו שני חורים קטנים ברדיוס של 1.0-1.5 מ"מ בצד שמאל וימין של הגולגולת כדי לאפשר החדרת מיקרואלקטרודות הקלטה לאזורי M2 תחת סטריאומיקרוסקופ (איור 1A).
הערה: מיקומים סטריאוטקסיים של M2 דו-צדדי: 1.94 מ"מ קדמי לברגמה, 1.0 מ"מ רוחבי לקו האמצע, ו-0.8-1.1 מ"מ גחוני לדורה.
- הסר את הדורה מאטר בזהירות עם מחט טונגסטן.
- משוך מיקרופיפטות בורוסיליקט זכוכית (קוטר חיצוני: 1.0 מ"מ) כמיקרואלקטרודות הקלטה עם התנגדות של 1-2 MΩ.
- הכניסו שתי מיקרואלקטרודות הקלטה נפרדות מלאות ב-0.5 M NaCl לתוך החורים באמצעות מיקרומניפולטורים מכניים (ב-60°, איור 1B).
2. רישומי LFP ב-M2 דו-צדדי של עכברים
- הורידו את אלקטרודות הזכוכית השמאלית והימנית באיטיות לקואורדינטות המתאימות של M2 דו-צדדי (איור 1C).
- לבקרת איכות, בדוק את ההתנגדות של כל אלקטרודה באמצעות מגבר הדיפרנציאל לפני לכידת LFPs.
- הגדר את תהליך ההקלטה במעבר גבוה של 0.1 הרץ ובמעבר נמוך של 1,000 הרץ עם הגברה של 1,000x.
- איסוף נתוני LFP גולמיים דיגיטליים של לפחות 60 שניות של פעילויות ספונטניות במצב יציב, כאשר עכברים נושמים באופן שווה בקצב נשימה של 2 נשימות לשנייה תחת הרדמה.
- לאחר ההקלטה, הרימו לאט את האלקטרודות אל מחוץ למוח, ואז הרדימו את העכברים על ידי נקע צווארי מהיר.
- שמור את הנתונים ונתח אותם במצב לא מקוון.
