מאמר שיטה

משקעים חיסוניים של קומפלקסים חלבון-DNA מטרה מ נוירון מוטורי ליזט

717 צפיות

⸱

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

מקור: Montanera, K. N. et al., Rhee, H. S. מיפוי ברזולוציה גבוהה של אינטראקציות חלבון-דנ"א בתאי גזע של עכבר באמצעות Chromatin Immunoprecipitation-Exonuclease (ChIP-Exo). J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים את המשקעים החיסוניים של מקטעי DNA המקושרים עם חלבון מטרה מליזטים של נוירון מוטורי שמקורו בתאי גזע באמצעות חרוזים מגנטיים מצופים נוגדנים ספציפיים לחלבון מטרה.

פרוטוקול

הערה: מים מזוקקים ונטולי יונים, Autoclaved (ddH2O) מומלצים להכנת חוצצים ותערובות מאסטר תגובה.

1. קצירת תאים והצלבתם

  1. לאחר התמיינות תאי גזע עובריים של עכברים (ES) לנוירונים פוסט-מיטוטיים, הוסיפו 11% פורמלדהיד לתאים שנקטפו לריכוז סופי של 1% (v/v). תאי סלע על משטח נדנדה (נדנדה, שייקר או מסובב) למשך 15 דקות, בטמפרטורת החדר (RT, 25°C).
    הערה: בהתאם לחלבון היעד שיש להצליב, ניתן להשתמש בפחות קרוסלינקינג פורמלדהיד (לדוגמה, ריכוז סופי של 0.5%) או קרוסלינקינג כפול עם דיסוצינימידיל גלוטרט (DSG).
  2. הוסף 2.5 M גליצין לריכוז סופי של 150 mM כדי לעצור את תגובת crosslinking. תאי סלע על משטח נדנדה ב- RT, למשך 5 דקות.
  3. צנטריפוגה את התאים הצולבים בצינורות חרוטיים של 15 מ"ל ב- RT, למשך 6 דקות, במהירות של 1,350 x גרם. לשאוף את התמיסה, ולאחר מכן להשעות תאים ב 5 מ"ל של 1x פוספט-buffered מלוחים (PBS).
    הערה: ניתן לאחסן את כדורי התא המוצלבים בטמפרטורה של -80°C לאחר הקפאת הבזק עם חנקן נוזלי.

2. ליזה של תאים

הערה: השלבים הבאים בפרוטוקול זה מיועדים לכ-2 x 107 תאים עצביים המובחנים מתאי ES של עכבר. כדי לפתוח תאים, ייעשה שימוש במאגרי ליזה המכילים חומרי ניקוי שונים. הוסף 50 μL של 1000x מלאי מעכב פרוטאז מלא (CPI) ל 50 מ"ל של מאגר ממש לפני השימוש.

  1. הכינו חוצצי ליזיס 1-3 כמתואר בטבלה 1.
  2. הפשירו כדורי תאים מוצלבים על קרח, ולאחר מכן השעו מחדש ביסודיות את כדורי התא ב-3 מ"ל של חיץ ליזיס 1 ב-15 מ"ל צינורות חרוטיים. סלע ב 4 ° C במשך 15 דקות על פלטפורמה נדנדה. צנטריפוגה ב 1,350 x גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C ולשאוף supernatant.
  3. ביסודיות resuspended תאים pelleted ב 3 מ"ל של חיץ ליזה 2. סלע ב 4 ° C במשך 10 דקות על פלטפורמת נדנדה. צנטריפוגה ב 1,350 x גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C ולשאוף supernatant.
  4. הוסף 1 מ"ל של חיץ ליזיס 3 לכל כדור, ולאחר מכן לשמור על קרח. מיד להמשיך סוניקציה.

3. סוניק כרומטין

הערה: יש לשמור דגימות על קרח או בטמפרטורה של 4°C במהלך הליך סוניקציה זה כדי להפחית היפוך קישורים צולבים.

  1. בעזרת מרית סטרילית, מוסיפים חרוזי סוניקציה (טבלת חומרים) עד לציון הסיום של 0.2 מ"ל על צינורות פוליסטירן 15 מ"ל. שטפו חרוזי סוניקציה על ידי ערבול ב-600 מיקרוליטר של PBS אחד עד שלא נראים כתמים יבשים. צנטריפוגה את הצינורות במשך 5 שניות ב 30 x g ולשאוף 1x PBS.
    הערה: סוניקציה בצינורות פוליסטירן יעילה יותר מסוניקציה בצינורות פוליפרופילן. אם מספר קטן יותר של תאים (לדוגמה, <106 תאים) הוא סוניקציה, להשתמש צינורות פוליסטירן 1.5 מ"ל מבלי להוסיף חרוזי סוניקציה.
  2. השהה מחדש ביסודיות את הליזטים הגרעיניים ב -1 מ"ל של חיץ ליזה 3 (משלב 2.4), ולאחר מכן העבר לצינורות פוליסטירן 15 מ"ל המכילים חרוזי סוניקציה. מערבלים בקצרה את צינורות הפוליסטירן.
  3. כדי לפצל את הדנ"א של הכרומטין הצולב, סוניקט ליזטים גרעיניים ב-4°C למספר אופטימלי של מחזורים, עם משרעת הספק של 30 W, ומחזורי סוניקציה מוגדרים ל-30 s on/30 s off.
    הערה: אופטימיזציה של סוניקציה עבור כל סוג תא ואצווה תביא לתפוקה הטובה ביותר של כרומטין immunoprecipitation-exonuclease (ChIP-exo). עבור 2 x 107 תאים עצביים עכבר, 20-30 מחזורי סוניקציה בהגדרות שהוזכרו יקטעו את הכרומטין בטווח של 100-500 bp.
  4. לאחר השלמת הסוניקציה, העבירו את כל הסופרנאטנט (lysates sonicated), מכל דגימה, לצינורות של 1.5 מ"ל. הוסף 10% 2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]אתנול) לכל דגימה בריכוז סופי של 1%. מערבבים על ידי pipetting.
  5. לפסולת תאי כדור, דגימות צנטריפוגות ב 13,500 x גרם במשך 10 דקות ב 4 ° C. להעביר את כל lysates sonicated (supernatant) מכל דגימה לצינורות חדשים 1.5 מ"ל.
  6. קח 30 μL של lysate sonicated מכל דגימה (~ 3% של lysate sonicated) ולהוסיף צינורות חדשים 1.5 מ"ל כדי לבדוק סוניקציה. יש לאחסן את שאריות הליזטים בטמפרטורה של 4°C עד שהן מוכנות לדגירה עם חרוזים מצופים נוגדנים.

4. בדיקת סוניקציה

  1. הפוך 20 מ"ל של 2x proteinase K חיץ על ידי הוספת 2 מ"ל של 0.5 M Tris-HCl (pH 8.0), 2 מ"ל של 0.5 M ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA), 10 מ"ל של 10% נתרן דודציל סולפט (SDS) ו 6 מ"ל של autoclaved ddH2O. אל תוסיף מדד המחירים לצרכן למאגר זה. יש לאחסן בצינור של 50 מ"ל ב-RT.
  2. כדי להפוך את הקישור חלבון-דנ"א, על ידי הסרת החלבונים, לקחת את 30 μL של כרומטין סוני מכל דגימה (משלב 3.6), להוסיף 166 μL של autoclaved ddH2O, 200 μL של 2x proteinase K buffer ו 4 μL של 20 mg/mL proteinase K. מערבלים לזמן קצר את הדגימות, ולאחר מכן לדגור ב 65 ° C במשך 1-3 שעות ב 24 x g.
  3. הערה: ניתן להצליב את הליזטים הסוניים ב-65°C למשך הלילה.
  4. חלץ DNA באמצעות פנול:כלורופורם:אלכוהול איזואמיל (PCIA: 25:24:1) ושיטת משקעים אתנול כדלקמן.
    זהירות: PCIA הוא רעיל. יש להשתמש מתחת למכסה אדים עם ציוד מגן אישי סטנדרטי (PPE).
    1. הוסף 400 μL של PCIA לכל דגימה בצינורות של 1.5 מ"ל, הגדר מערבולות למהירות מרבית ודגימות מערבולת למשך 20 שניות. צנטריפוגה ב- 18,400 x גרם למשך 6 דקות ב- RT. ייצפו שני שלבים. העבר בזהירות את השכבה המימית העליונה (שלב ברור) של כל דגימה לצינורות חדשים של 1.5 מ"ל.
    2. הוסף 1 μL של 10 מ"ג / מ"ל RNase A. דגימת דגירה ב 37 ° C במשך 30 דקות.
    3. הוסף 1 μL של 20 מ"ג / מ"ל גליקוגן לכל דגימה, ולאחר מכן לזרז עם 1 מ"ל של 100% אתנול קר כקרח (מאוחסן במקפיא -20 ° C). יש לערבב לזמן קצר, ולאחר מכן לדגור על הדגימות במקפיא בטמפרטורה של -80°C למשך 30 דקות עד שעה. דגימות צנטריפוגות ב 18,400 x גרם במשך 10 דקות ב 4 ° C בזהירות לשפוך החוצה 100% אתנול.
    4. יש לשטוף כדוריות עם 500 μL של אתנול 70% קר כקרח (מאוחסן במקפיא -20°C). צנטריפוגה ב 18,400 x גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C. בזהירות לשפוך החוצה 70% אתנול.
    5. דגימות דגירה בצינורות 1.5 מ"ל ב 50 ° C עד אתנול הנותר מתאדה. להשהות מחדש כדורי DNA ב 15 μL של ddH2O autoclaved או ddH2O ללא nuclease.
    6. הריצו את דגימות הדנ"א שחולצו, יחד עם סולם DNA, בג'ל אגרוז 1.5% במתח של 120-180 וולט ובדקו את גודל הדנ"א הסוניקטיבי.

5. דגירה נוגדנים עם חרוזים

הערה: השלבים הבאים בפרוטוקול זה מיועדים לכ-2 x 107 תאים עצביים המובחנים מתאי ES של עכבר. אין להקפיא ולהפשיר חרוזים מגנטיים בשום שלב במהלך פרוטוקול ChIP-exo מכיוון שהחרוזים עלולים להיסדק ולגרום לזיהום הדגימה או שביצועי הנוגדן עלולים להיפגע.

  1. לאחר ליזה התא וסוניקציה, להכין חלבון G חרוזים מגנטיים (טבלה של חומרים) עבור ChIP, לערבב חרוזים מגנטיים עד הומוגני, ולאחר מכן להוסיף 25 μL של חרוזים מגנטיים 2 מ"ל חלבון נמוך bind tubes.
    הערה: סוג החרוזים המגנטיים בהם נעשה שימוש יהיה תלוי במין הנוגדנים.
  2. שטפו חרוזים עם 1 מ"ל של תמיסת חסימה (טבלה 1), ערבבו היטב ולאחר מכן הניחו על מדף מגנטי למשך דקה. בעודכם עדיין על מדף מגנטי, הסירו את הסופרנאטנט ברגע שהוא צלול.
  3. הוסף 1 מ"ל של פתרון חסימה לחרוזים המגנטיים. צינורות סלע במשך 10 דקות ב 4 ° C על פלטפורמת נדנדה. סובב לזמן קצר, ולאחר מכן הנח צינורות על מדף מגנטי והסר supernatant.
  4. חזור על שלב 5.3 פעמיים נוספות.
  5. הוסף 500 μL של פתרון חוסם לחרוזים מגנטיים. סובב בקצרה את הנוגדן כנגד Isl1 (0.04 מיקרוגרם/μL, טבלת חומרים), ולאחר מכן הוסף 4 מיקרוגרם נוגדן לצינורות המתאימים של 2 מ"ל חלבון בקישור נמוך המכילים את החרוזים המגנטיים בתמיסת חסימה.
  6. חזור על שלב 5.5 ללא נוגדנים (כלומר, בקרת נוגדנים ללא ChIP).
    הערה: ניתן לקבוע אמפירית את כמות הנוגדנים שיש להוסיף על ידי התחשבות באיכות הנוגדן ובמספר התאים המשמשים ל- ChIP.
  7. דגימות סלע ב 4 ° C במשך 6 - 24 שעות על פלטפורמת נדנדה.

6. משקעים חיסוניים של כרומטין (ChIP)

  1. לשטוף חרוזים מצופים נוגדנים משלב 5.8 עם 1 מ"ל של פתרון חסימה. מניחים דגימות על משטח נדנדה ב 4 ° C למשך 5 דקות. להסיר supernatant.
  2. חזור על שלב 6.1 פעמיים נוספות.
  3. יש להשהות מחדש חרוזים מצופים נוגדנים בתמיסת חסימה של 50 מיקרוליטר, ולאחר מכן להעביר לצינורות חדשים בעלי קישור נמוך של 2 מ"ל חלבון. עבור כל דגימת ChIP, הוסף ליזטים סוניים (~ 1.0 מ"ל משלב 3.6) לחרוזים מצופים נוגדנים בצינורות קישור נמוך של 2 מ"ל
    4. .
  4. יש לדגור על כל דגימה על משטח נדנדה למשך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.

7. שטיפות ChIP

הערה: יש לשמור דגימות על קרח או בטמפרטורה של 4°C כדי לשמור על קישור צולב חלבון-DNA במהלך שטיפות ChIP.

  1. צור חיץ שטיפת מלח גבוה, חיץ שטיפה LiCl וחיץ Tris-HCl של 10 mM (pH 7.4) כמתואר בטבלה 2. יש לאחסן בצינורות של 50 מ"ל בטמפרטורה של 4°C. יש להוסיף 50 μL של מלאי CPI של 1000x לכל המאגרים ממש לפני השימוש.
    2. יש לסובב
  2. בקצרה דגימות בצינורות 2 מ"ל חלבון בעלי קשירה נמוכה כדי לאסוף נוזלים מהמכסים, ולאחר מכן להניח על מדף מגנטי למשך דקה אחת ולהסיר סופרנאטנט בזהירות עם פיפטה.
  3. לשטיפות ChIP, יש להוסיף 1 מ"ל של חיץ ליזיס 3 (ב-4°C) לכל צינור. מערבבים על משטח נדנדה ב-4°C למשך 5 דקות. יש לסובב בקצרה דוגמיות, ואז להניח על מדף מגנטי למשך דקה אחת ולהסיר את supernatant עם פיפטה.
  4. הוסף 1 מ"ל של חיץ כביסה קר עתיר מלח לכל צינור. מערבבים על משטח נדנדה ב-4°C למשך 5 דקות. יש לסובב דוגמאות קצרות, ואז להניח על מדף מגנטי למשך דקה אחת ולהסיר את supernatant עם פיפטה.
  5. יש להוסיף 1 מ"ל של חיץ שטיפה LiCl קר לכל צינור. מערבבים על משטח נדנדה ב-4°C למשך 5 דקות. יש לסובב דוגמאות קצרות, ואז להניח על מדף מגנטי למשך דקה אחת ולהסיר את supernatant עם פיפטה.
  6. הוסף 1 מ"ל של חיץ Tris-HCl קר 10 mM (pH 7.4) לכל צינור. מערבבים על משטח נדנדה ב-4°C למשך 5 דקות. יש לסובב בקצרה דוגמיות, ואז להניח על מדף מגנטי למשך דקה אחת ולהסיר את supernatant עם פיפטה.
    הערה: ניתן להשתמש במאגר Tris-EDTA (pH 8.0) במקום במאגר Tris-HCl (pH 7.4).

טבלה 1: מתכונים למאגרי ליזיס 1-3 ומאגר חוסם. יש לאחסן בצינורות של 50 מ"ל בטמפרטורה של 4°C. יש להוסיף 50 μL של 1000x CPI (מעכב פרוטאז מלא) לכל המאגרים ממש לפני השימוש.

Lysis buffer 1
מגיבנפח (מ"ל)[סופי]
1 מטר HEPES (pH 7.3)2.550 מ"מ
5 מטר NaCl1.4140 מ"מ
0.5 מטר EDTA (pH 8.0)0.11 מ"מ
50% גליצרול1010%
10% אוקטילפנול אתוקסילט2.50.50%
10% 2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)פנוקסי]אתנול1.250.25%
ddH אוטומטי2Oמלא עד 50
Lysis buffer 2
מגיבנפח (מ"ל)[סופי]
0.5 מטר Tris-HCl (pH 8.0)110 מ"מ
5 מטר NaCl2200 מ"מ
0.5 מטר EDTA (pH 8.0)0.11 מ"מ
ddH אוטומטי2Oמלא עד 50
Lysis buffer 3
מגיבנפח (מ"ל)[סופי]
1 מטר Tris-HCl (pH 8.0)0.510 מ"מ
5 מטר NaCl1100 מ"מ
0.5 מטר EDTA (pH 8.0)0.11 מ"מ
10% חומצה דאוקסיקולית0.50.10%
30% N-Lauroylsarcosine תמיסת מלח נתרן0.830.50%
ddH אוטומטי2Oמלא עד 50
פתרון חסימה
מגיבכמות[סופי]
אלבומין בסרום בקר (BSA)250 מ"ג0.50%
מעכב פרוטאז מלא (CPI, 1000x)50 מיקרוליטר1x
מלח חוצץ פוספט (PBS)למלא עד 50 מ"ל

טבלה 2: מתכונים לשטיפות ChIP: מאגר High Salt Wash, חיץ LiCl Wash ומאגר Tris-HCl של 10 mM (pH 7.4). יש לאחסן בצינורות של 50 מ"ל בטמפרטורה של 4°C. יש להוסיף 50 μL של מלאי CPI של 1000x לכל המאגרים ממש לפני השימוש.

חיץ שטיפת מלח גבוה
מגיבנפח (מ"ל)[סופי]
1 מטר HEPES (pH 7.3)2.550 מ"מ
5 מטר NaCl5500 מ"מ
0.5 מטר EDTA (pH 8.0)0.11 מ"מ
10% 2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)פנוקסי]אתנול51%
5% חומצה דאוקסיקולית10.10%
5% SDS10.10%
ddH אוטומטי2Oמלא עד 50
LiCl חיץ כביסה
מגיבנפח (מ"ל)[סופי]
0.5 מטר Tris-HCl (pH 8.0)220 מ"מ
0.5 מטר EDTA (pH 8.0)0.11 מ"מ
1 מטר LiCl12.5250 מ"מ
10% אוקטילפנול אתוקסילט2.50.50%
5% חומצה דאוקסיקולית50.50%
ddH אוטומטי2Oמלא עד 50
10 mM Tris-HCl buffer
מגיבנפח (מ"ל)[סופי]
1 מטר Tris-HCl (pH 7.4)0.510 מ"מ
ddH אוטומטי2Oמלא עד 50

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Agarose, UltraPureInvitrogen16500בדיקת סוניקציה (סעיף 4.3.6)
אלבומין, סרום בקר (BSA), ללא פרוטאזות, בידוד זעזועי חום, מינימום 98%ביושופmichal_1977פתרון חסימה
נוגדן נגד Isl1DSHB39.3ו7החדרת נוגדנים עם חרוזים (סעיף 5.6)
Bioruptor PicoדיאגנודהB01060010סוניק כרומטין (סעיף 3.3)
צנטריפוגה 5424 Rאפנדורף5404000138Sonicating Chromatin (סעיף 3.5), בדיקת סוניקציה (סעיף 4.3.1, 4.3.3 ו-4.3.4)
צנטריפוגה 5804 Rאפנדורף22623508קציר, קישור צולב והקפאת תאים (סעיף 1.3), ליזה של תאים (סעיף 2.2 ו-2.3), סוניק כרומטין (סעיף 3.1)
קוקטייל מעכבי פרוטאז שלם, מיני וללא EDTAרוש4693159001נוסף לכל המאגרים למעט מאגר Proteinase K ומאגר ChIP Elution
חומצה דאוקסיקולית מלח נתרןפישר סיינטיפיקBP349Lysis Buffer 3, High Salt Wash Buffer ו-LiCl Wash Buffer
EDTA, 0.5 מטר, תמיסה סטרילית, pH 8.0ביושופEDT111Lysis Buffer 1-3, בדיקת סוניקציה (סעיף 4.1), High Salt Wash Buffer, LiCl Wash Buffer ו-ChIP Elution Buffer
אתיל אלכוהול נטול מים, 100%אלכוהול מסחריP006EAANבדיקת סוניקציה (סעיף 4.3.3)
פורמלדהיד, 36.5-38%, מכיל 10-15% מתנולסיגמאF8775קציר, קישור צולב והקפאת תאים (סעיף 1.1)
גליצרול, כיתה מגיב, מינימום 99.5%ביושופGLY002חיץ ליזיס 1
גליצין, ציון ביוטכנולוגיה, מינימום 99%ביושופGLN001קציר, קישור צולב והקפאת תאים (סעיף 1.2)
גליקוגן, בדרגת RNAתרמו סיינטיפיק₪2001בדיקת סוניקציה (סעיף 4.3.3)
HEPES, תמיסה מסוננת סטרילית באורך 1 מטר, pH 7.3ביושופHEP003חיץ ליזיס 1, חיץ שטיפת מלח גבוה
ליתיום כלוריד (LiCl), בדרגת מגיבביושופLIT704מאגר כביסה LiCl
חרוזים מגנטיים עבור ChIP (חלבון Dynabeads G)Dynabeads Protein G (חרוזים מגנטיים עבור ChIP)Dynabeads Protein G (חרוזים מגנטיים עבור ChIP)דגירה נוגדנים עם חרוזים (סעיף 5)
ארון תקשורת מגנטי (מגנט DynaMag-2)Invitrogen12321דמשמש בשלבים רבים במקטעים: 5
N-Lauroylsarcosine תמיסת מלח נתרן, 30% תמיסה מימית, ≥97.0% (HPLC)סיגמא61747חיץ ליזיס 3
אוקטילפנול אתוקסילט (IGEPAL CA630)ביושופNON999Lysis Buffer 1 ו-LiCl Wash Buffer
פנול:כלורופורם:איזואמיל אלכוהול, כיתה ביוטכנולוגית (25:24:1)ביושופPHE512בדיקת סוניקציה (סעיף 4.3.1)
מלח חוצץ פוספט (PBS), 1xקורנינג21040CVקציר, קישור צולב והקפאת תאים (סעיף 1.3) וסוניקת כרומטין (סעיף 3.1), החדרת נוגדנים עם חרוזים (סעיף 5.1)
ספק כוח בסיסי PowerPacBioRad1645050בדיקת סוניקציה (סעיף 4.3.6)
תמיסת פרוטאינאז K, בדרגת RNAInvitrogen25530049בדיקת סוניקציה (סעיף 4.2)
Rnase A, ללא דנאז ופרוטאזתרמו סיינטיפיקEN0531בדיקת סוניקציה (סעיף 4.3.2)
נתרן כלורי (NaCl), מגיב ביולוגיסיגמאS5886חיץ ליזיס 1-3, חיץ שטיפת מלח גבוה
נתרן דודציל סולפט (SDS), בדרגת אלקטרופורזהביושופSDS001בדיקת סוניקציה (סעיף 4.1), חיץ שטיפת מלח גבוה ומאגר ChIP Elution
חרוזי סוניקציה ושפופרות 15 מ"ל BioruptorדיאגנודהC01020031סוניקת כרומטין (סעיף 3.1 ו-3.2)
ThermoMixer F1.5אפנדורף5384000020סעיפים 4.2, 4.3.2 ו-4.3.5
תמיסת טריזמה הידרוכלוריד (Tris-HCl), מאושרת לביצועים ביולוגיים, 1 מטר, pH 7.4סיגמאT219410 mM Tris-HCl Buffer
תמיסת Trizma hydrochloride (Tris-HCl), מאושרת לביצועים ביולוגיים, 1 M, pH 8.0סיגמאT2694Lysis Buffer 2, Lysis Buffer 3, בדיקת סוניקציה (סעיף 4.1), LiCl Wash Buffer ו-ChIP Elution Buffer
נדנדה VWR מיני צינור, מהירות משתנהVWR10159-752משמש בשלבים רבים במקטעים: 1, 2, 5, 6 ו- 7
2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]אתנול, Triton X-100, כיתה מגיבביושופTRX506Lysis Buffer 1, Sonicating Chromatin (סעיף 3.4) ו-High Salt Wash Buffer

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

DNA

מאמרים קשורים