גרימת דלקת עצבית בזחלי דגי זברה עם הזרקת ליפופוליסכריד

תקציר

מקור: He, Y. et al. מיקרו-הזרקות חדריות במוח של ליפופוליסכריד לדגי זברה זחלים להערכת דלקת עצבית ורעילות עצבית. J. Vis. Exp. (2022).

הסרטון מדגים מיקרו-הזרקה של ליפופוליסכרידים (LPS) למוחם של זחלי דגי זברה כדי לגרום לדלקת עצבית. הזחלים ממוקמים על צלחת מרופדת באגרוז, המחט מוחדרת לחדרי המוח, וה-LPS מוזרק. ה-LPS המוזרק מעורר תגובה חיסונית שמובילה לדלקת עצבית.

פרוטוקול

1. הכנה למיקרו-הזרקה

1. התכוננו להזרקה על ידי משיכת נימי זכוכית באמצעות מושך מיקרופיפטה (ראו טבלת חומרים), בהתאם לפרוטוקול בן חמישה שלבים למשיכת צינור נימי זכוכית (טבלה 1).
2. פתח את קצה המחט (נימי זכוכית דקים [3.5 אינץ'] עם חוט להט, קוטר חיצוני [OD] 1.14 מ"מ) לגודל המתאים בזווית באמצעות מלקחיים (איור 1A).
3. מלא את המחט עם 0.1 מ"ל של שמן מינרלי כדי להבטיח כי אין בועות.
4. הסר את מכסה הבורג של מחט הפלדה של מנגנון המיקרו-הזרקה. יישרו את חור מחט הזכוכית עם מחט הפלדה ולאחר מכן הדקו את מכסה הבורג. הרכיבו את מכשיר המיקרו-הזרקה של המחט הטעונה במיקרומניפולטור (ראו טבלת חומרים).....

תוצאות

טבלה 1: פרוטוקול בן חמישה שלבים למשיכת צינור נימי זכוכית.

צעד	זמן פעולה (שניות)	רמת חום	פעולה
T1	L>	H80-89	P1L005
T2	1.6-3	H00
T3<.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אגרוז	סיגמא-אולדריץ'	A6361
אגרוז, טמפרטורת ג'לינג נמוכה	סיגמא-אולדריץ'	A9414
Drummond Nanoject III מזרק ננוליטר ניתן לתכנות	דרמונד סיינטיפיק	3-000-207
מיקרוסקופים סטריאופוניים פלואורסצנטיים	לייקה	M205 FA
Lipopolysaccharides מ Escherichia coli O111:B4	סיגמא-אולדריץ'	L3024
מיקרומניפולטור ידני	מכשירים מדויקים בעולם	M3301
שמן מינרלי	סיגמא-אולדריץ'	M5904
מלח חוצץ פוספט	סיגמא-אולדריץ'	עמ' 4417
נימי זכוכית דקים לקיר (4 אינץ') עם חוט להט, OD 1.5 מ"מ	מכשירים מדויקים בעולם	TW150F-4
טריקאין (3-אמינו חומצה בנזואית אתיל אסטר)	סיגמא-אולדריץ'	A-5040