$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. בדיקת חדירות In vivo
- הכנת פתרונות:
- עבור תמיסות מלאי דקסטרן, יש להמיס 10 מ"ג של 10 kDa Dextran Alexa Fluor 488 וכן 3 kDa Dextran Texas Red ב-500 μL של תמיסת נתרן כלורי 0.9% (20 מ"ג/מ"ל).
- עבור פתרון העבודה dextran, ממש לפני הזרקת pipet 55 μL של 10 kDa Dextran Alexa Fluor 488 תמיסת מלאי (20 מ"ג / מ"ל) על חתיכת סרט איטום ולהוסיף 55 μL של 3 kDa dextran טקסס תמיסת סטוק אדום (20 מ"ג / מ"ל). יש לערבב ולאסוף 100 מיקרוליטר במזרק חד פעמי דק (ריכוז סופי: 2 מ"ג/100 מיקרוליטר).
- לקבלת תמיסת 10% פורמלדהיד (Paraformaldehyde, או PFA), יש לערבב 10 גרם של אבקת PFA טהורה במיוחד, 100 מ"ל של PBS ו-200 מיקרוליטר של נתרן הידרוקסידי 1N (NaOH) במיכל זכוכית נקי ולחמם ל-56°C בדיוק תחת ערבוב באמצעות מערבל מגנטי. יש לשמור על טמפרטורה של 56°C למשך 30 דקות עד להמסה מוחלטת של ה-PFA. מצננים לטמפרטורת החדר, מתאימים את רמת החומציות ל-7.4 ומסננים דרך מסנן נייר. יש לאחסן בטמפרטורה של —20°C. ניתן לדלל את תמיסת המלאי עוד יותר באמצעות מלח חוצץ פוספט או PBS.
- יש להרדים במהרה עכברי C57BL/6 בריאים או עכברי C57BL/6 הסובלים מאנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית, או EAE עם איזופלורן (העכבר יהיה מורדם למשך כדקה). השתמש במערכת אוטומטית (עכברים ייחשפו ל-4.5% איזופלורן בחמצן בתא אינדוקציה ולאחר מכן יועברו למסכת פנים עם 2.1% איזופלורן).
- הניחו את העכבר המורדם במצב רוחבי על השולחן, ולאחר מכן הזריקו לעכבר 100 מיקרוליטר של נותבי פלורסנט (למשל רטרו-מסלוליים) 100 מיקרוליטר של נותבי פלורסנט לפני שהעכבר מתעורר.
- הסירו מיד את מסכת הפנים וודאו שהעכבר ער לחלוטין ונע לאחר ההרדמה הקצרה. תן לנותב להסתובב במשך 15 דקות.