הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
983 צפיות
⸱
8 ביולי 2025
מקור: Cosset, E., et al. אורגנואידים עצביים אנושיים לחקר סרטן המוח ומחלות נוירודגנרטיביות. J. Vis. Exp. (2019)
בסרטון זה מודגם פרוטוקול מדורג של תאי גזע עובריים אנושיים לאורגנואידים עצביים. השיטה כוללת גרימת היווצרות רוזטה עצבית, ואחריה הבשלה מבוקרת וטיפוח סופי על קרום הידרופובי כדי להשיג אורגנואידים עצביים מפותחים במלואם.
1. תחזוקה ותרבית של תאי גזע עובריים אנושיים לא ממוינים (hESCs)
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צלחת 6 בארות (צלחת 6 בארות) | פלקון / קורנינג | 07-201-588 | |
| אגרוול 400 (צלחות תרבית מיקרווול) | טכנולוגיות StemCell | 34421 | |
| תוספי B27 (B27) | לייף טכנולוגיות / Invitrogen | 1238 | עבור שני הפרוטוקולים, פתרון מלאי 100x, פתרון סופי 1x |
| גורם נוירוטרופי מוחי (BDNF) | הנחיית תאים | GFH1-2 | עבור שני הפרוטוקולים, תמיסת מלאי 100 מיקרוגרם/מ"ל ב-H2O טהור, תמיסה סופית 20 ננוגרם/מ"ל |
| Compound E a γ–secretase inhibitor (מעכב γ–secretase) | קלביוכם | CAS 209986-17-4 | עבור שני הפרוטוקולים (מעכב גמא-secretase XXI), תמיסת מלאי 5 mM ב- DMSO, פתרון סופי 1 מיקרומטר |
| דימתיל סולפוקסיד טהור (DMSO) | סיגמא-אולדריץ' | C6164 | תרכובות ממסות, מוכנות לשימוש |
| מדיום הנשר המעובד של דולבקו (DMEM) | לייף טכנולוגיות | 12491-015 | עבור תרבית תאים, מוכן לשימוש |
| תערובת בינונית עיט שונה של דולבקו F-12 (DMEM-F12) | גיבקו | 11320033 | עבור תרבית תאים, מוכן לשימוש |
| EDTA 0.1 מילימ"ר (EDTA) | לייף טכנולוגיות | AM9912 | עבור תרבית תאים, מוכן לשימוש |
| גורם נוירוטרופי שמקורו בתאי גליה (GDNF) | הנחיית תאים | GFH2-2 | עבור שני הפרוטוקולים, תמיסת מלאי 100 מיקרוגרם/מ"ל ב-H2O טהור, תמיסה סופית 20 ננוגרם/מ"ל |
| קרום פוליטטרה-פלואוראתילן הידרופילי (קרום PTFE) | ממשק BioCell | הופסק | |
| LDN-193189 (מעכב BMP) | Axon Medchem /Stemgen | 04-0072-02 /1509 | Dual/Smad, פתרון מלאי 5 מ"מ ב-DMSO, פתרון סופי 0.5 מיקרומטר |
| ל-גלוטמין (ל-גלוטמין) | גיבקו | 25030081 | L-גלוטמין (200 מילימול), תמיסת מלאי 200 מילימול, תמיסה סופית 2 מ"מ |
| מטריג'ל (מטריצה חוץ-תאית) | BD Biosciences | 354277 | מטריצה בעלת הסמכת hESC, תמיסת מלאי 18-22 מ"ג/מ"ל, תמיסה סופית 180-220 מיקרוגרם/מ"ל |
| הוספת צלחת תרבית מיליצל-CM (0.4 מיקרומטר) (הוספת צלחת תרבית) | מיליפור | PICM03050 | |
| נוגדן חד שבטי נגד β-טובולין III | סיגמא | T8660 | דילול 1/1000 |
| MS Orbital Shaker, MS-NOR-30 (שייקר מסלולי) | מדע עיקרי | MS-NRC-30 | |
| נוירובזל (נוירובזל) | לייף טכנולוגיות / Gibco | 21103049 | תחזוקה והבשלה אוכלוסיות תאים עצביים עובריים , מוכן לשימוש |
| חומצות אמינו לא חיוניות (NEAA) | גיבקו | 11140 | חומצות אמינו לא חיוניות 100X, תמיסת מלאי 100x, תמיסה סופית 1x |
| נוגדן Nurr1 (M-196) | סנטה קרוז | SC-5568 | דילול 1/100 |
| Nutristem (hESC בינוני) | תעשיות ביולוגיות | 05-100-1א | מדיה של תאי גזע, מוכנה לשימוש |
| פניצילין / סטרפטומיצין (פניצילין / סטרפטומיצין ) | לייף טכנולוגיות / Gibco | 15140122 | עבור תרבית תאים, תמיסת מלאי 5 מ"ג/מ"ל, תמיסה סופית 50 מיקרוגרם/מ"ל |
| פוספט מלח חוצץ ללא Ca2+/Mg2+ (PBS ללא Ca2+/Mg2+) | לייף טכנולוגיות | 14190250 | עבור תרבית תאים, מוכן לשימוש |
| קינאז הקשור לרו Y-27632 (ROCK) | Abcam ביוכימיקלים | ab120129-1 | מעכב סלעים, תמיסת מלאי 50 מילימטר ב-DMSO, תמיסה סופית 10 מיקרומטר |
| SB-431542 (מעכב TGFβ/Activin/Nodal) | עלייה | ASC- 163 | Dual-Smad, פתרון מלאי 50 מ"מ ב-DMSO, פתרון סופי 10 מיקרומטר |
| StemPro Accutase (תמיסה אנזימטית hESC) | גיבקו | A11105-01 | פתרון אנזימטי hESC, מוכן לשימוש |
| בקבוק T150 (צלוחיות T150) | בז | 08-772-1F | |
| שינוי גורמי גדילה בטא 3 (TGFβ3) | הנחיית תאים | GFH109-2 | עבור פרוטוקול דופמינרגי, תמיסת מלאי 100 מיקרוגרם/מ"ל באתנול טהור, תמיסה סופית 1 נ"ג/מ"ל |
| טריפסין 0.25% (תמיסה אנזימטית) | לייף טכנולוגיות | 15050065 | פתרון אנזימטי, מוכן לשימוש |
| X-vivo (מדיום ללא סרום) | לונזה | BE04-743Q | מדיום ללא סרום, מוכן עבורך |
