הקמת זיהום HIV פעיל במודל חולדה

תקציר

מקור: Li, H., McLaurin, et al. A Rat Model of EcoHIV Brain Infection. J. Vis. Exp. (2021).

סרטון זה מדגים את הליך הזרקת נגיפי HIV כימריים לקליפת המוח של חולדה, שם ה-RNA של הנגיף משתלב בגנום המארח, משתכפל ומתפשט כדי לבסס זיהום HIV פעיל במודל הניסוי.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. EcoHIV-EGFP [Ecotropic HIV משופר Green Fluorescent Protein] ניתוחים סטריאוטקסיים וירוס

1. מרדימים חולדות באמצעות 3% sevoflurane. כאשר החולדות אינן מגיבות לגירויים מזיקים והרפלקסים שלהן נעדרים, המשך לשלב 1.2.
2. יש לגלח את השערות מאזור המוח ולעקר את העור פעמיים עם 70% אתנול וקרצוף על בסיס כלורהקסידין. אבטחו את החולדה במצב נוטה במנגנון הסטריאוטקסי.
3. בצע חתך (5-6 ס"מ) דרך העור לאורך קו האמצע של הקרקפת.
4. סמן שתי עמדות קידוח ב 0.8 מ"מ רוחבי, 1.2 מ"מ רוסטרלי לברגמה. קדח חור (קוטר 0.4 מ"מ) בכל מיקום גולגולת.
5. מלא תמיסת EcoHIV lentivirus טיטראטית (1.04 × 10⁶ TU/mL) במזרק הזרקה של 10 μL. אבטחו את המזרק למנגנון הסטריאוטקסי.
6. הזז במורד המחט קרוב לפני השטח של חור הקידוח. מדוד והזז 2.5 מ"מ עומק.
7. להחדיר 1 μL של תמיסת וירוס בקצב של 0.2 μL / min. לשמור את המחט בתוך אזור ההזרקה במשך 5 דקות. לאט להזיז את המחט למעלה עד שהיא מחוץ לגולגולת חולדה.
8. תפרו את העור בחוט משי 4-0.
9. לעקר את החתך עם 70% אתנול פעם אחת. הזרקה תת עורית של בוטורפנול (דורולקס, 0.1 מ"ג/ק"ג משקל גוף).
10. העבירו את החולדה לחדר התאוששות עם כרית חימום עד שתתעורר.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
פתרון אנטיביוטי-אנטי-מיקוטי	סלגרו	30004CI	פי 100
כיסוי זכוכית	VWR	637-137
מקדחה
Ethicon Vicryl Plus אנטיבקטריאלי, תפר 4-0 פוליגלקטין 910, 27in. FS-2	Med Vet הבינלאומי	VCP422H
מזרק המילטון	המילטון	1701
איריס מלקחיים	מכשירים מדויקים בעולם	15914
מספריים של איריס	מכשירים מדויקים בעולם	500216
מנגנון סטריאוטקסי	קופף אינסטרומנטס	דגם 900
מספריים של Vannas	מכשירים מדויקים בעולם	500086