גרימת אוטם פונס חריף במודל חולדה באמצעות גירוי חשמלי

תקציר

מקור: Luo, M., et al. הקמת אוטם פונטיני חריף בחולדות על ידי גירוי חשמלי. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים הליך לגרימת נזק לרקמות או אוטם בפונס של חולדה מורדמת באמצעות גירוי חשמלי.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הקמת אוטם בפונס

1. חממו מראש את כרית החימום מיד לפני ההרדמה.
2. חבר את מקדחת הגולגולת למחזיק על המסגרת הסטריאוטקסית.
3. הזריקו תוך צפקית לחולדות 50 מ"ג/ק"ג קטמין ו-5 מ"ג/ק"ג קסילזין. בדוק את חוסר התגובה צביטת הבוהן.
4. הרכיבו את החולדה על המסגרת הסטריאוטקסית במצב נוטה. מקמו את מוטות האוזניים מעל תעלת האוזן כדי לאבטח את הראש. ודא כי הגולגולת נשמרת אופקית כדי למנוע כל הטיה של ההזרקה.
5. יש לשמור על הרדמה על ידי איזופלורן (100% חמצן, 2.5% איזופלורן) באמצעות חיבור חרוט אף סטריאוטקסי לחולדות עם יציאות כניסה ויציאה. השתמש כרית חימום כדי לשמור על הטמפרטורה ב 37 ° C ולפקח על זה לאורך כל ההליך.
6. יש להשתמש במשחת עיניים למניעת התייבשות הקרנית. השתמש במלקחיים כדי לצבוט את הכפות כדי להבטיח שלא תהיה תגובה קלה לכאב.
7. לגלח את שיער הגולגולת עם מיקרו מכונת גילוח. יש למרוח באופן מעגלי את הפילינג הכירורגי כלורהקסידין החל מאתר החתך הניתוחי ומסתובב כלפי חוץ.
8. בצע חתך קו אמצע של 3 ס"מ עם אזמל מקו הקנטוס הצידי הדו-צדדי עד 0.5 ס"מ מאחורי הפונטנלה האחורית, שעט סמן כירורגי צריך לסמן.
9. השתמש צמר גפן כדי להסיר דם.
10. פיסת סרט כירורגי צריכה להיות מונחת על כל צד של דש העור כדי לחשוף את הקרקפת (איור 1).
11. הסר בעדינות את רקמות החיבור מעצם הגולגולת עם צמר גפן טבול ב -0.9% NaCl. אם לא יוסרו, רקמות החיבור ייתפסו במקדחה.
12. זהה את הברגמה. בחרו את הנקודה המרכזית של הברגמה כנקודת המוצא וסמנו אותה באמצעות עט טוש כירורגי שחור בעל קצה עדין.
13. מקמו מקדחה בנקודת גישה של 6.0 מ"מ, 2.0 מ"מ ML (טווח בין 0.5 ל-3.0 מ"מ, איור 2A).
14. ביצוע קרניוטומיה (קוטר 1 מ"מ) באמצעות מקדחה אוטומטית. המשך בזהירות כי נקודה זו קרובה לסינוס הוורידי.
15. הסר את המקדחה מהמסגרת הסטריאוטקסית.
16. הניחו גשושית 22G עם נדן מבודד במסגרת הסטריאוטקסית (איור 3A). קצה הגשושית צריך להיות ממוקם 2 מ"מ מעל הקצה הפרוקסימלי של הנדן (איור 3A, B; איור 2B).
17. ודא שהנדן נכנס למוח 7 מ"מ (7 מ"מ DV, איור 2B; איור 1C).
18. תקדמו את הגשושית לאורך הנדן (איור 1D) עד שקצה הגשושית נמצא 9 מ"מ מתחת לפני השטח של המוח (איור 2D).
19. חברו את האלקטרודות לממריץ חשמלי (איור 3C). חברו את האנודה לגשושית כפי שמוצג באיור 1D. חברו את הקתודה לחולדות (בדרך כלל לאוזן של החולדות).
20. הפעל את הממריץ החשמלי והגדר את הפרמטרים הבאים: רוחב פולס יחיד = 4,050 אלפיות השנייה; מתח = 50 וולט; וזרם = 4 mA (איור 3C). במהלך גירוי חשמלי, החולדה תפגין רעד. במחקר זה, המכשיר לא הופעל עבור חולדות קבוצת ביקורת ששימשו למבחני התנהגות, MRI ו-TTC.
21. השאירו את הבדיקה במקומה למשך 5 דקות לאחר הגירוי.
22. הסירו את הגשושית מהמוח (איור 1F).
23. השתמש מלט עצם כדי לכסות את craniotomy. הניחו לצמנט להתייבש לפני תפירת הפצע.
24. תפרו את הפצע עם 4-0 חוטי תפר פוליאמיד. לאחר שלושה או ארבעה תפרים, לקשור 2-1-1 קשרים כירורגיים סטנדרטיים.
25. הזריקו לחולדות פניצילין (0.25 מ"ל, 80 יחב"ל מדולל ב -4 מ"ל מלח) תוך צפקית כדי למנוע זיהום.
26. הזריקו לחולדות מלוקסיקם תת עורית במינון של 2 מ"ג/ק"ג ולאחר מכן חזרו על כך כל 24 שעות.
27. עקבו אחר החולדות כל 15 דקות עד שהן ערות לחלוטין והחזירו אותן לכלוב עם כרית חימום. לספק גישה חופשית למזון ומים עד להקרבה.
    הערה: כל ההליכים צריכים לעקוב אחר עקרונות כירורגיים אספטיים. לפני הניתוח יש ללבוש משטח קרצוף, מסכה כירורגית וכפפות סטריליות לאחר קרצוף כירורגי של הידיים. יש לשמור תמיד על חומר תפר סטרילי בתוך השדה הסטרילי.

תוצאות

איור 1: הקמת אוטם. (A) חור שנעשה בגולגולת. (B) הנדן מועבר לחור. (ג) הזרקת הנדן. (ד) הזרקת הבדיקה. (E) האנודה (חץ אדום) מחוברת. (ו) הבדיקה מוסרת. (G) חור (חץ אדום) שנותר בפני השטח של המוח.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
4-0 סוכה	שנגחאי ג'ינז'ונג		כלי ניתוח
סרט הדבקה	שנגחאי ג'ינז'ונג		כלי ניתוח
מערכת הרדמה לבעלי חיים	RWD		יש לעטות מסכה בעת השימוש במערכת
מלט עצם	שנגחאי ג'ינז'ונג		כלי ניתוח
מהדק נרפא	שנגחאי ג'ינז'ונג		כלי ניתוח
מספריים כלליים לרקמות	שנגחאי ג'ינז'ונג		כלי ניתוח
אינדופורס	Guoyao של סין		עיקור
איזופלורן	RWD	217181101
מכשיר להכנת נגעים	שנגחאי יויאן		ביצוע נגע
מערכת MRI	ברוקר ביוספין		אישור אוטם in vivo
מחזיק מחטים	שנגחאי ג'ינז'ונג		כלי ניתוח
פניצילין	Guoyao של סין		מניעת זיהומים
בדיקה	אנונימי		צריך קצת שינוי
עצות Q	שנגחאי ג'ינז'ונג		כלי ניתוח
גזירת מספריים	שנגחאי ג'ינז'ונג		כלי ניתוח
מנגנון סטריאוטקסי	RWD
מחט תפירה	שנגחאי ג'ינז'ונג		כלי ניתוח
רקמות אוחזות מלקחיים	שנגחאי ג'ינז'ונג		כלי ניתוח
TTC	סיגמא-אולדריץ'	BCBW5177	לאישור אוטם במבחנה