$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. צנתור עורקים
- להרדים את העכבר עם הזרקה intraperitoneal של קטמין ו xylazine ומשכך כאבים על פי הנוהג המקומי (למשל, buprenorphine). צבטו את הגפיים האחוריות במלקחיים כדי לאשר את עומק ההרדמה הנכון.
הערה: במחקר זה נעשה שימוש בעכברי C57BL/6N זכרים בגיל 8-12 שבועות (משקל 20-25 גרם). המחברים בדקו BALB/c זכרים באותו גיל ללא הצלחה, אך לא ניסו זנים אחרים.
- הסר את השיער באזורי העניין (ראש, צוואר) באמצעות סכין גילוח חשמלי. ודא שלא נשאר שיער רפוי כדי למנוע זיהום פצעים. לאחר מכן, יש לחטא את שדה הניתוח עם 70% אתנול/כלורהקסידין/בטדין ולהניח את העכבר בשכיבה כשראשו פונה למנתח.
- בצע חתך קו אמצע צוואר הרחם עם מספריים נתיחות.
- לנתח את הבלוטות submandibular ואת רקמת שריר הצוואר ולהפריד אותם על מנת לחשוף את עורק התרדמה המשותף. השתמש בעיקר בדיסקציה קהה באמצעות מלקחיים.
- מקום 3-0 8-0 ליגטורות משי מתחת לעורק התרדמה המשותף הימני.
- מניחים מהדק על הרצועה הפרוקסימלית ומביאים מתח לעורק כך שהזרימה מושעה.
- סגור את הליגטורה הדיסטלית ביותר.
- הכנס את הצנתר העורקי דרך חור עור קטן ומוכן באספקט הגולגולתי של החתך. לסחוט ולעוות את לומן של קטטר אם הוא נראה גדול מדי כדי להפחית את זרימת הדם בחזרה. קבע עם כל שלוש הליגטורות.
- קבע את הצנתר לעור כדי למנוע נקע. עשו זאת באמצעות תפר (למשל, 5-0 מונופילמנט, לא נספג) המחבר את הצנתר לעור באזור חור העור המוגדר.
2. טרכאוסטומיה
- נתחו את השרירים הקדם-טרכיאליים בבוטות באמצעות מלקחיים.
- מקום שני 8-0 ליגטורות משי מתחת לקנה הנשימה.
- קנה הנשימה באמצעות מספריים מיקרו קרוב ככל האפשר כדי למנוע אוורור חד צדדי. השתמש בקו חיתוך אופקי בין שני סחוסי קנה הנשימה.
- הכנס את צינור האוורור וקיבע עם שתי הליגטורות המוכנות.
הערה: הקצה הפרוקסימלי של קנה הנשימה אינו צריך להיות קשור.
- סגור את העור עם תפר ריצה (למשל, 6-0 monofilament, לא נספג).
- אוורר את העכבר בתדירות של 150/min ובנפח גאות של 200 μL.
3. השראת מוות מוחי (BD)
- סדר את העכבר למצב נוטה.
- הסר את העור מהגולגולת באמצעות מספריים כירורגיים ומלקחיים כדי להחזיק את העור.
- קדח קידוח בקוטר 1 מ"מ באופן פרמדיאלי מעל קליפת המוח הקודקודית השמאלית. יש להפסיק את הקידוח לפני פריצת העצם הקומפקטית הפנימית והדורה מאטר.
- לחדור את גשר הרקמה הסופי של הגולגולת באמצעות מלקחיים קהה, הסרת קצוות חדים.
- הכנס את קטטר הבלון, כך שהוא יהיה כולו בתוך חלל הגולגולת. ודאו שהבלון ממולא מראש במי מלח וכל האוויר פונה.
- התחל אינפלציה ב~0.1 מ"ל/דקה על פני תקופה של 10-15 דקות (נפח כולל של 0.8-1.2 מ"ל) בעזרת משאבת מזרק.
הערה: העכבר יציג מיוקלונוס, מידריאזיס, פעילות פרכוסית נוספת והתנשפויות אגונליות.
- הגה את המוח של העכבר כמת ברגע שזנב העכבר נעשה נוקשה וזקוף.
הערה: BD מאושר על ידי שיא לחץ דם ראשוני אופייני (רפלקס קושינג), היעדר רפלקסים בגזע המוח ונשימה ספונטנית. יש להימנע מבדיקות קבועות של דום נשימה במהלך ניסויים, מכיוון שעכברים עלולים להפוך לבלתי יציבים במחזור הדם עקב מחסור בחמצן.
- לעצור את האינפלציה של קטטר הבלון.
- שים שמיכת חימום על העכבר כדי למנוע היפותרמיה.