ביצוע פגיעה מוחית הנגרמת על ידי לייזר במודל חולדה

תקציר

מקור: Kuts, R., et al. פגיעה מוחית הנגרמת על ידי לייזר בקליפת המוח המוטורית של חולדות. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים הליך ליצירת פגיעה מוחית מדויקת ומבוקרת בקליפת המוח המוטורית של חולדה באמצעות לייזר.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הליך ניסיוני של פגיעה מוחית הנגרמת על ידי לייזר

1. מרדימים את החולדה בתערובת של 2% איזופלורן בחמצן, מה שמאפשר אוורור ספונטני. בדוק עומק הרדמה מספיק על ידי צביטת הזנב עם מלקחיים כדי לראות אם רפלקס הנסיגה נעדר.
2. באמצעות כרית חימום מווסתת טמפרטורה רקטלית, לשמור על טמפרטורת הגוף הליבה של החולדה על 37 מעלות צלזיוס לאורך כל הליך הניסוי.
3. יש להסיר שיער מקומי בעזרת מכונת גילוח ולחטא אותו ב-70% אלכוהול ו-0.5% כלורהקסידין גלוקונאט. חזור על שלב החיטוי פעמיים נוספות.
   הערה: רוחב החתך הניתוחי צריך להיות כ-3 ס"מ. יש להסיר שיער לפחות 2 ס"מ סביב אזור החתך.
4. הניחו את החולדה על מחזיק ראש סטריאוטקסי במצב נוטה. בצעו חתך של 3 ס"מ כדי לשקף את הקרקפת לרוחב וחשפו את האזור שבין ברגמה ללמדא.
5. שמור על הרדמה דרך חרוט האף.
6. השתמש בלייזר Neodymium-YAG (Nd-YAG) (אורך גל שיא 1064 ננומטר) כדי לתת 50J X 10 נקודות, עם משך פעימה של 1 s, לאזור החשוף של הגולגולת מעל ההמיספרה הימנית.
7. ודא שהחלק המייצר לייזר של המכשיר נמצא במרחק של 2 מ"מ מהאזור החשוף כדי לייצר קרן לייזר. 50J X 10 נקודות נבחרו לאחר הערכה זהירה של שילובי אנרגיה / משטח שונים. שילוב זה יעיל ואינו גורם להרס עצם הגולגולת לאחר מתן למשך פחות משנייה.
   הערה: 2 מ"מ הוא המרחק בין המסוף של קרן הלייזר (מהכבל האופטי דרכו הוא מועבר) לבין עצם הגולגולת. במקרה שנעשה שימוש בעדשת מיקוד, יש לחשב את המרחק, תוך התחשבות בזווית הנטייה של העדשה למקד את הקרן באזור הנזק הרצוי. הקפידו על בטיחות נאותה בעת השימוש במכשיר לייזר, כולל הדרכה מתאימה והגנה על העיניים.
8. הוציאו את החולדה מהמכשיר וסגרו את הקרקפת עם 3-0 תפרים כירורגיים ממשי.
9. יש להפסיק את ההרדמה ולהחזיר את החולדה לכלוב להחלמה. לנהל 0.1 מ"ל של 0.25% bupivacaine באופן מקומי כדי להפחית את הכאב לאחר הניתוח מיד לאחר הניתוח.
   הערה: ההליך כולו אמור להימשך פחות מ -5 דקות אם מבוצע כראוי.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מטריצות מוח ורקמות	סיגמה - אולדריץ'	15013
סולם שקילה דיגיטלי	סיגמה - אולדריץ'	RS 4000
אתנול 96	רומי		נוזל דליק
תנור חימום עם מדחום	כרית חימום-1	דגם: HEATINGPAD-1/2
שרוול עירוי	ABN	IC-500
איזופלורן, USP 100%	Piramamal טיפול קריטי, Inc	נד"ק 66794-017
להבי אזמל 11	סיגמה - אולדריץ'	S2771
Sharplan 3000 Nd:YAG (ניאודימיום מסומם איטריום אלומיניום גארנט) מכונת לייזר	תעשיות לייזר בע"מ
מחזיק ראש סטריאוטקסי	קופף	900LS

%