מודל במבחנה של פציעת מתיחה בתאי עצב פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם

תקציר

מקור: Phillips, J. K. et al. שיטה לפציעת מתיחה במהירות גבוהה של תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם בפורמט של 96 בארות. J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מדגים את התהליך של גרימת פציעת מתיחה על נוירונים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם (hiPSCNs). התאים נלקחים בצלחת מרובת בארות ללא תחתית עם קרום סיליקון מחובר. לחץ מכני מבוקר מופעל על הממברנה כדי לגרום להפרעה בשלד הציטו-שלד ולנזק לקרום התא, וגורם לפנוטיפ של פציעת מתיחה בתאים.

פרוטוקול

1. ייצור צלחות

1. פלזמה - טפל בחלק העליון של צלחת 96 בארות עם שואב פלזמה 200W (ראה טבלת חומרים) במשך 60 שניות בהספק גבוה, והציב אותו בצד התחתון למעלה בתוך שואב הפלזמה. בדוק זוהר סגול גלוי דרך החלון של החדר, אשר מציין כי פלזמה יעילה נוצרה. טכניקת מליטה זו לקוחה מ Sunkara et al.
2. תוך 60 שניות, הניחו את ראש הצלחת ב-200 מ"ל של 1.5% (3-אמינופרופיל) טריאתוקסיסילן (APTES) במים שעברו דה-יוניזציה (DI) למשך 20 דקות, מלמטה למטה. פתרון זה אינו יציב: להכין אותו לא יותר מ 60 s לפני הצגת הצלחת.
   זהירות: עבוד עם APTES במכסה אדים.
3. פלזמה מטפלת בקרום סיליקון שחולץ בשואב הפלזמה במשך 60 שניות בהספק גבוה. הזמן את טיפול הפלזמה כך שהוא יסתיים לא יותר מ 5 דקות לפני סוף פרק הזמן של 20 דקות בשלב 1.2.
4. השתמש במלקחיים כדי למקם את הקרום שטופל בפלזמה על גבי מלבן נייר אפייה^{בגודל 7.5} x 11 ס"מ 2. יישרו לוח אלומיניום בגודל 7.5 ס"מ x 11 ס"מ x 0.5 ס"מ בחלק התחתון של מהדק ייצור הצלחת. יישרו את קרום הסיליקון ונייר האפייה על לוח האלומיניום בעזרת מלקחיים.
5. הסר את צמרות הצלחת מאמבט APTES ונער את עודפי התמיסה. טבלו באמבט מים DI של 200 מ"ל למשך 5 שניות ונערו את עודפי המים. טבלו באמבט מים אחר של 200 מ"ל DI למשך 5 שניות ונערו את עודפי המים. החליפו את המים באמבטיות אלה לפני טבילת צלחת נוספת.
6. השתמשו באוויר דחוס כדי לייבש לחלוטין את ראש הצלחת.
7. הניחו את ראש הצלחת בחלק העליון של מהדק ייצור הצלחת. סגור בעדינות את מהדק ייצור הצלחת כדי ללחוץ על ראש הצלחת והסיליקון יחד. מהדקים למשך שעה אחת לפחות.
8. הניחו לצלחת להחלים במשך 24 שעות בטמפרטורת החדר לפני השימוש, מוגנים מאבק.

2. מתיחת צלחת

1. נקה את הכניסות
   1. הכינו סוניקטור בסגנון אמבטיה 60W עם מי DI בטמפרטורת החדר.
   2. תמכו בבלוק האינדנטר שמעל אמבט הסוניקטור, הפוך כך שרק החלק העליון של הכניסות שקוע לעומק של לפחות 1 מ"מ. סוניק את הכניסות למשך 8 דקות במהירות של 42 קילוהרץ.
   3. ייבשו את הכניסות באוויר דחוס.
2. יישור בלוק האינדנטר
   1. מקם מצלמה עם הזנה חיה מעל התקן המתיחה כך שהיא תביט מטה על מערך הכניסה. התמקד בחלק העליון של הכניסה.
      הערה: ההגדרה המתוארת בסעיף 3, "אפיון מתיחת ממברנה", היא אחת מהגדרות המצלמה האפשריות למשימה זו.
   2. הדקו פלטה על הבמה של מכשיר הפציעה באמצעות מהדקי הבמה (איור 1) והניחו פנס כיפה מעל המכשיר.
      הערה: עיין בטבלת החומרים של תוכנת בקרת המכשירים.
   3. הפעל את תוכנת בקרת המכשירים על ידי לחיצה על סמל התוכנה בשולחן העבודה של המחשב השולט במכשיר הפציעה. הפעל את הפרויקט "in_vitro_neurotrauma.lvproj" על ידי לחיצה עליו בחלון ההשקה. מחלון הפרויקט, הפעל את המכשירים הווירטואליים של בקרת התנועה ומעקב המיקום (VIs), הנקראים 'motion_control.vi' ו- 'position_tracker.vi', בהתאמה, על ידי לחיצה כפולה עליהם.
   4. סגור את הכלוב המקיף את מכשיר הפציעה. לחץ על כפתור 'חץ' בפינה השמאלית העליונה של בקרת התנועה VI כדי להפעיל את VI ולחץ על 'קרוב למטה' כדי להוריד את הבמה למרחק של 2 מ"מ ממגע עם הכניסים. לחץ על כפתור 'עצור' כדי לעצור את VI.
      זהירות: יש להרחיק את הידיים מהאלונקה בעת הפעלת המצלמה בכלוב. יש להתקין בכלוב מתג דלת המעביר חשמל למכשיר המתיחה רק כאשר דלת הכלוב סגורה.
   5. בחלון הפרויקט, לחץ לחיצה ימנית על 'ציר 1'. לחצו על 'פאנל בדיקה אינטראקטיבי'. בחלון שנפתח, הגדר את גודל המדרגה ל- 50 מיקרומטר על ידי הזנת '500' יחידות בשדה 'מיקום יעד'.
   6. לחץ על הלחצן הירוק 'go' בתחתית החלון 'לוח בדיקה אינטראקטיבי' שוב ושוב עד שהלוח יוצר מגע ראשון עם כל כניסה. בדוק אם יש איש קשר בתמונה החיה המוצגת על-ידי המצלמה. שימו לב למיקום הבמה האנכית שדווח בפינה השמאלית העליונה של חלון 'לוח בדיקה אינטראקטיבי'; זוהי עמדת הקשר הראשונה.
   7. מנמיכים עוד יותר (כמתואר בשלב 2.2.6) עד שכל באר יוצרת מגע עם הכניסות. במידת הצורך, הזיזו את המצלמה כדי לראות את כל הצלחת והזיזו את הבמה למעלה (על ידי ציון 'מיקום יעד' שלילי) ולמטה. שים לב למיקום השלב האנכי המדווח בפינה השמאלית העליונה של החלון כאשר כל ההודעות נמצאות בקשר (זהו מיקום איש הקשר המלא).
   8. שים לב להבדל בין איש הקשר הראשון לבין מיקום איש הקשר המלא. סגור את 'לוח הבדיקה האינטראקטיבי'. הפעל את 'בקרת תנועה VI' (ראה שלב 2.2.4) ולחץ על 'למעלה' כדי להעלות את הבמה. עצור את בקרת התנועה VI באמצעות כפתור 'עצור'.
   9. ברגע שהבמה נמצאת בחלק העליון של נסיעתה, פתח את הדלת כדי להשבית את המכשיר. כוונן את הברגים הקבועים בפינות בלוק האינדנטר. שחררו את בורג הסט בפינה שיצר מגע ראשון, כדי להוריד אותו ולהדק את הבורג הנגדי כדי להרים את הפינה שיצרה מגע אחרון.
   10. חזור על תהליך הנמכת הבמה עד שהלוח יבוא במגע עם הכניסים, בדוק את תמונות המגע להטיה, הגבהת הבמה והתאמת (שלב 2.2.9) של בלוק הכניסה. כאשר השלב והבלוק מיושרים, כל הכניסות ייצרו קשר בבת אחת.
   11. פתח את הדלת כדי להשבית את המכשיר. הכנס את ברגי הקשירה לחורים שלהם בבלוק האינדנטר והדק אותם. ודא שהבלוק ישר עם ברגי הקשירה במקומם (שלבים 2.2.4-2.2.8). שימו לב למיקום הבמה המדווח על ידי 'לוח הבדיקה האינטראקטיבי' כאשר הצלחת יוצרת מגע. זו תהיה עמדת האפס לניסויי הזחה.
3. לשמן את הכניסות
   1. אם בלוק האינדנטר הותקן זה עתה וטרם עבר שימון, נקו פד גומי מוצק (7.5 ס"מ x 11 ס"מ x 1.5 מ"מ) ופד גומי מוקצף רך וסגור (7.5 ס"מ x 11 ס"מ x 3 מ"מ) עם מגבון מעבדה ספוג אתנול. הניחו להם להתייבש באוויר.
   2. השרו מגבון מעבדה בשמן תירס ומרחו אותו על כרית הגומי המוצק לברק עמום.
   3. הניחו את כרית הקצף על כרית הגומי המוצק כדי להעביר שמן לכרית הקצף. הניחו לוח אלומיניום בגודל 7.5 ס"מ x 11 ס"מ x 0.5 ס"מ על גבי כרית הקצף והעמיסו אותו במשקל נטל של כ-360 גרם (למשל, 6 צינורות חרוטיים עמוסים ב-45 מ"ל מים כל אחד) כדי להבטיח העברה עקבית של שמן משטח הגומי המוצק לכרית הקצף. יש להמתין 10 שניות עד שהשמן יעבור למשטח הגומי המוקצף.
   4. העבר את כרית גומי הקצף למערך האינדנטר. הניחו עליו את לוח האלומיניום ואת משקל הנטל כדי להבטיח העברה עקבית של השמן לקצות הכניסות. אפשר 10 שניות לשמן לעבור לכניסות.
   5. אם אף צלחת לא נמתחה מאז שבלוק האינדנטר הוקם ושימן בפעם הראשונה, מתחו צלחת בדיקה לפני תחילת הניסוי. הערה: פעולה זו תמנע מכל חוסר עקביות בין המתיחה הראשונה למתיחה הבאה לבלבל את הניסוי. עבור מתיחות הבאות, חזור רק על שלבים 2.3.2-2.3.5 לפני כל מתיחה.
4. מותחים צלחת
   1. שמן את הכניסות כמתואר בשלב 2.3.
   2. אבטח את הצלחת על הבמה של מכשיר הפציעה עם מהדקי הבמה. אם נדרשת סטריליות, התאימו את מיקום המכסה כדי לאבטח את הצלחת מבלי לחשוף את משטח התרבית לאוויר החדר.
   3. הנמיכו את הבמה למיקום אפס באמצעות 'בקרת תנועה VI' (ראו שלבים 2.2.4-2.2.6); מיקום אפס נקבע במהלך שלב 2.2.
   4. שנה את שם הקובץ בשדה "נתיב קובץ" ב'מעקב אחר מיקום VI' לשם קובץ ייחודי, ולאחר מכן הפעל אותו באמצעות לחצן 'חץ' בפינה השמאלית העליונה של חלון זה.
   5. הגדר את עומק ומשך הכניסה (בדרך כלל 1-4 מ"מ ו- 30 מילישניות, בהתאמה, עומק מרבי 5 מ"מ, משך מינימלי 15 מילישניות) בשדות 'פציעה (מ"מ)' ו'משך פציעה (ms)' בלוח בקרת התנועה VI על ידי לחיצה על השדות והקלדת הערכים הרצויים.
   6. הפעל את 'לוח בקרת תנועה VI' ולחץ על 'פצע' כדי להסיט פנימה את הצלחת.
   7. הזיזו את הבמה לראש המסע שלה על ידי לחיצה על 'למעלה'. לאחר מכן עצור את ה- VI עם כפתור 'עצור' והשבת את מכשיר הפציעה על ידי פתיחת הדלת.
   8. בדוק את היסטוריית התזוזה של השלב המוצג ב'מעקב מיקום VI' כדי לאשר שהוחל העקירה המרבית שצוינה. לחץ לחיצה ימנית על הגרף ולחץ על 'ייצוא לאקסל'. לחצו על 'קובץ| שמור' כדי לשמור את הנתונים.

3. אפיון מתיחת קרום

1. צבעו את השקע בחלק העליון של כל כניסה בלבן כדי לספק רקע בעל ניגודיות גבוהה לצילום וידאו במהירות גבוהה. אזהרה: אין לצבוע את שולי הכניסות במקום שבו הן באות במגע עם פלטות.
2. הדפס תלת מימד עם פולי (חומצה לקטית) (PLA), או לייצר בדרך אחרת, חותמת גלילית שבה ניתן ליצור נקודה בכל באר. הפוך את הגליל לקוטר 5.9 מ"מ ולגובה 12.2 מ"מ, עם בליטה גלילית בקוטר 1.5 מ"מ ובגובה 1.0 מ"מ ממורכזת למעלה.
3. פלזמה מטפלת בצלחת בצד ימין כדי להפעיל את משטח תרבית תאי הסיליקון בבארות במשך 60 שניות, כפי שהוזכר בשלב 2.1.
4. הניחו את הצלחת על כרית גומי או על משטח רך אחר. הבליטה הקטנה על החותמת (ראה שלב 1.2) בדיו מעט טוש קבוע. הכנס את החותמת לבאר לבדיקה והקש כדי להבטיח העברה טובה של דיו. הקדימו את הבול לפני כל באר.
5. יישר את בלוק הכניסה ושימון הכניסות של התקן הפציעה (ראה שלבים 2.2-2.3). הדקו את הצלחת לשלב של מכשיר הפציעה. מקם אור צירי בהיר ומפוזר מעל מכשיר הפציעה.
6. התקינו מצלמה במהירות גבוהה על מעמד בום מעל מכשיר הפציעה, עם הפנים ישר כלפי מטה, כשהעדשה מכוונת ל-f-stop הממוספר הקטן ביותר, והפעילו אותה. הפעל את תוכנת המצלמה במחשב המחובר למצלמה. בתפריט הנפתח של קצב המסגרות, בחר 2,000 פריימים לשנייה, ובתפריט הנפתח של התריס, בחר את זמן החשיפה המהיר ביותר שמפיק תמונות עם ניגודיות גבוהה. מרכז מעל הבארות המנוקדות.
   1. מקם את המצלמה כך ששדה הראייה יכיל 12 בארות ברשת 3 x 4.
      הערה: שדה ראייה זה מציע פשרה אופטימלית בין התפוקה לרזולוציה עבור תמונה של 1,280 × 1,024.
7. הנמיכו את הלוח לנקודת האפס (ראו שלבים 2.2.4-2.2.6). לחץ פעם אחת על לחצן ההקלטה בתוכנת המצלמה כך שיהיה כתוב 'trigger in'. הפעל את מעקב המיקום VI (שלב 2.4.4).
8. הפעל את האור הצירי הבהיר והמפוזר. הכנס פנימה את הצלחת כמתואר בשלב 2.4.6.
9. כבו את האור הצירי הבהיר והמפוזר.
10. במחשב בקרת המצלמה, אתר את החלון 30-40 אלפיות השנייה של ההקלטה שבה מתרחשת הכניסה: גרור את חיצי ההתחלה והסיום בסרגל הפעלת הווידאו במהירות גבוהה בתוכנת המצלמה. לחץ על שמור, הגדר את השם בשדה 'שם קובץ', בחר 'TIFF' בשדה 'עיצוב' ולחץ על 'שמור'.
    1. תסתכל דרך . קובצי TIF לתמונות של המצבים הכי פחות מתוחים (התחלה) והכי מתוחים (כניסת שיא).
    2. למדידת הגובה והרוחב של הנקודות בשתי התמונות, השתמשו בפיג'י כדי לפתוח את התמונות של הנקודה הקטנה ביותר ושל שיא המתיחה זו לצד זו. בעזרת כלי הבחירה המלבני של ברירת המחדל, לחצו וגררו כדי לצייר תיבה מסביב לנקודה בתמונה עם הכי פחות מתיחה. מדוד את הגובה והרוחב באמצעות 'נתח | מידה'.
    3. חזור על הפעולה עבור הנקודה באותה באר בתמונת מתיחה של שיא. חזור על הפעולה עבור שאר הבארות.
11. חשב את הזן הלגראנז'יאני בכיוון x ו- y באופן הבא:
    
    הערה: כאן, E_xx הוא הזן הלגראנז'יאני בכיוון x, E_yy הוא הזן הלגראנז'יאני בכיוון y, X הוא רוחב הנקודה, Y הוא גובה הנקודה, _f מציין את התמונה הסופית (כלומר, תמונת כניסת השיא), _ואני מציין את התמונה הראשונית (כלומר, התמונה שלפני הכניסה). ממוצע שני הערכים כדי לקבוע את המתח באותה באר.

4. ציפוי התאים בתרבית

1. בצע אוטוקלב לפחים ולמשקולות נטל שישמשו לעיקור.
2. פלזמה לטפל לוחות תחתית סיליקון בצד ימין למעלה במשך 60 s (ראה שלב 1.1). מיד לטבול את הצלחות בפחים סטריליים המכילים 70% אתנול במשך 15 דקות.
3. טבלו את הצלחות במי מלח סטריליים חוצצים פוספט (PBS) בפחים סטריליים נפרדים למשך 30 דקות.
4. לשאוף את PBS מן הבארות. יש לייבש רק צלחת אחת בכל פעם כדי למנוע מהבארות לאבד את טיפול הפלזמה.
   זהירות: לוחות עם תחתית סיליקון מספקים פחות משוב מישושי מאשר לוחות קשיחים בעת פיפט ונוטים יותר לחסום את קצה הפיפטה.
5. הוסף 100 μL של 0.1 מ"ג / מ"ל פולי-L-אורניתין (אש"ף) לכל באר ללוחות מעוקרים. יש לדגור בטמפרטורת החדר למשך שעה אחת.
6. שטפו את הבארות פעמיים עם PBS סטרילי של 100 מיקרוליטר, והשאירו את השטיפה השנייה על הבארות עד שתרחיף התא מוכן.
7. הסר את בקבוקון hiPSCN מאחסון חנקן נוזלי באמצעות כפפות בטיחות והניחו על קרח יבש. העבירו במהירות את הבקבוקון לאמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס והפשירו למשך 3 דקות בדיוק. אין לערבל את הבקבוקון.
8. במכסה מנוע סטרילי, להעביר בעדינות את התוכן של הבקבוקון לצינור חרוטי 50 מ"ל באמצעות פיפטה סרולוגית 1 מ"ל.
9. יש לשטוף את הבקבוקון הקריוגני הריק ב-1 מ"ל של אמצעי תחזוקה מלאים בטמפרטורת החדר (בסיס מדיה + תוספת).
10. העבר את 1 מ"ל של מדיה לתוך צינור 50-מ"ל טיפה טיפה בערך טיפה אחת לשנייה. סובבו בעדינות את הצינור תוך כדי הוספה. הוסף 8 מ"ל של מדיום תחזוקה מלאה בטמפרטורת החדר לצינור 50 מ"ל בערך 2 טיפות לשנייה.
11. מכסים את הצינור והופכים 2-3 פעמים. לספור את התאים עם hemocytometer. חשב את נפח המדיה הנוספת הדרושה לדילול תרחיף התא ל- 225,000 תאים/מ"ל.
12. מזרימים בעדינות את כמות המדיה (מחושבת לעיל) לתוך הצינור של תרחיף התא באמצעות פיפטה סרולוגית 25 מ"ל.
13. הוסף 10 μL של 1 מ"ג / מ"ל מלאי למינין לכל 1 מ"ל של תרחיף תאים עם מיקרופיפטה של 1,000 μL כדי להשיג 10 מיקרוגרם / מ"ל של למינין בתרחיף התא. יש לשאוף למעלה ולמטה פעם אחת עם הקצה המשמש לרמינין, ואז לסגור את הצינור ולהפוך את הצינור פעם אחת.
14. שאפו את ה-PBS מהצלחות, צלחת אחת בכל פעם. השתמש פיפטה רב ערוצית כדי להוסיף 100 μL של תרחיף תאי hiPSCN לכל באר. שטח התרבית של הבארות הוא 0.33 ס"מ², כך שצפיפות התאים לשטח היא 67,500 תאים לסמ"ק².
15. הניחו את הצלחות בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות לאחר הזריעה כדי לקדם את ההתקשרות. כדי למנוע תנודות מאוורר של מכסה מנוע סטרילי, הניחו את הצלחות המכוסות על ספסל המעבדה. לדגור על התרביות ב 37 ° C עם 5% CO₂.
16. בצע שינוי מדיה מלא ב 24 שעות, מילוי הבארות עם 200 μL של מדיה תחזוקה מלאה. בצע החלפת חצי מדיה של 100 מיקרוליטר / באר כל 2-3 ימים.

5. פגיעה בתרבויות

1. יישר את בלוק ה- indenter ומצא את מיקום האפס כמתואר בשלב 2.2. שמן את הכניסות כמתואר בשלב 2.3.
2. הגדר את שם הקובץ עבור היסטוריית העקירה ב- 'מעקב מיקום VI' (שלב 2.4.4). הגדר את פרמטרי הפציעה ב'בקרת תנועה VI' (שלב 2.4.5).
3. מוציאים את הצלחת מהאינקובטור ומהדקים אותה לבמה. התאימו את מיקום המכסה כדי לאבטח את הצלחת מבלי לחשוף את התרביות לאוויר החדר.
4. הנמיכו את הצלחת לנקודת האפס (שלבים 2.2.4-2.2.6) באמצעות 'בקרת תנועה VI'. הפעל את 'מעקב מיקום VI' (שלב 2.4.4).
5. השתמש בבקרת התנועה VI כדי להסיט פנימה את הצלחת (כמתואר בשלב 2.4.6). עבור מתיחות דמה, דלג רק על שלב זה.
6. החזר את הבמה לראש טווח התנועה שלה (ראה שלב 2.4.7). מחזירים את הצלחת לאינקובטור.
7. בדוק ושמור את מעקב העקירה (כמו בשלב 2.4.8).

תוצאות

איור 1: סכימה מסומנת של מכשיר הפציעה.(A) מבט מלמעלה, (B) מבט איזומטרי, (C) מבט קדמי, (D) מבט ימני. סרגל קנה המידה חל על התצוגות האורתוגרפיות (A, B ו- D).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
גיליון סיליקון .010"	ייצור מיוחד, Inc	#70P001200010	יריעת פולידימתילסילוקסאן (PDMS)
ניצוץ	פישר סיינטיפיק	#043204
Nunc 256665	פישר סיינטיפיק	#12-565-600	צלחת באר ללא תחתית 96
מגבוני קים	ULINE	S-8115
מנקה פלזמה	האריק פלזמה	#PDC-001-HC
(3-אמינופרופיל) טריאתוקסיסילן	סיגמא-אולדריץ'	#440140	APTES
נייר אפייה	ריינולדס	לא ישים
אור כיפה	CCS inc	LFX2-100SW
ספק כוח Dome Light	CCS inc	PSB-1024VB
יחידת תאורה מפוזרת צירית	סימנס	נרלייט DOAL-75-LED	אור צירי מפוזר
מערך LED בהספק גבוה	קרי	XLamp CXA2540	מערך LED בהספק גבוה
מחזיק LED	מולקס	1807200001	מחזיק LED
ספק כוח LED	מתכוון היטב	HLG-320H-36B	ספק כוח זרם קבוע
תוכנת FastCam Viewer	פוטרון		מצלמה רכה
Fastcam Mini UX50	פוטרון	לא ישים	מצלמה במהירות גבוהה
Micro-NIKKOR 105 מ"מ f/2.8	ניקון	#1455	עדשת מצלמה במהירות גבוהה
0.1 מ"ג/מ"ל פולי-L-אורניתין	סיגמא-אולדריץ'	#P4597
iCells	דינמיקה סלולרית בינלאומית	#NRC-100-010-001
מדיה iCell	דינמיקה סלולרית בינלאומית	#NRM-100-121-001
תוסף iCell	דינמיקה סלולרית בינלאומית	#NRM-100-031-001
למינין	סיגמא-אולדריץ'	#L2020
מפעיל סליל קול	ביי קימקו	LA43-67-000A
מקודד ליניארי אופטי	רנישו	T1031-30A
כונן סרוו	קופלי קונטרולס	קסנוס XTL
בקר	מכשירים לאומיים	cRIO 9024 בקר PowerPC בזמן אמת
מארז cRIO	מכשירים לאומיים	cRIO 9113
מודול קלט דיגיטלי	מכשירים לאומיים	NI 9411
מארז רכישת נתונים	מכשירים לאומיים	NI 9113
LabVIEW	מכשירים לאומיים
hiPSCN	דינמיקה סלולרית בינלאומית