$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל ההליכים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. בעלי חיים
- יש לשמור על זן דגי זברה TgBAC (gfap:gfap-GFP) 167 (AB) בגילאי 6-9 חודשים בתנאים סטנדרטיים במים עם טמפרטורה של 26.5°C ומחזור אור/חושך של 14/10 שעות.
2. הרדמה מערכתית הפיכה
- הכן את תמיסת המלאי של מלח אתיל 3-אמינובנזואט מתאן-סולפונט (טריקאין) על-ידי המסת 400 מ"ג אבקת טריקאין ב-97.9 מ"ל מי מיכל ו-2.1 מ"ל של 1 מ"ל מלח חוצץ טריס (TBS). התאם ל- pH 7.0 עם 1 M Tris (pH 9) ואחסן ב- 4 ° C בחושך עד חודש אחד.
הערה: טריקאין צריך להיות מוכן במים כמו תנאי החיים הטבעיים של החיה, רצוי מי מיכל המקורי יש להשתמש.
- יש לדלל את תמיסת המלאי ל-1:25 במיכל ולהשתמש מיד.
- הכניסו את דגי הזברה לצלחת פטרי בקוטר 10 ס"מ המכילה 50 מ"ל של תמיסת הרדמה עד שהם הופכים לחסרי תנועה ואינם מגיבים לגירויים חיצוניים (כ-2-5 דקות, תלוי במשקל ובגיל).
- העבירו כל דג ביד למחזיק סיכות סיליקון בהתאמה אישית לטיפול לייזר (איור 1A).
זהירות! הדג יכול להישאר מורדם מחוץ למכל עד 10 דקות בלבד.
- כדי להפוך את ההרדמה לאחר הטיפול ו / או ההדמיה, הניחו את דגי הזברה במיכל המכיל מי מיכל.
- כדי לתמוך בהתאוששות, צרו זרימה של מי מיכל מתוקים מעל הזימים על ידי הזזת דגי הזברה קדימה ואחורה במים.
3. פגיעה מוקדית בלייזר ברשתית
הערה: לייזר דיודה 532 ננומטר משמש ליצירת נזק לאור מוקד ברשתית של דג הזברה. המערך הניסיוני של הלייזר מאפשר ביסוס פגיעה רשתית מוקדית הניתנת לשחזור בדגי זברה בוגרים.
- הגדר את הספק היציאה של הלייזר: 70 mW; קוטר אווירי: 50 מיקרומטר; משך פולס: 100 ms.
זהירות! השימוש באור לייזר מחייב הגנה אישית מתאימה ותיוג של האזור.
- יש למרוח 1-2 טיפות של 2% הידרוקסיפרופיל מתילצלולוז באופן מקומי בעין לפני הטיפול ולהשתמש בעדשת לייזר פונדוס 2.0 מ"מ כדי למקד את קרן הלייזר מכוונת על הרשתית.
זהירות! טיפות הידרוקסיפרופיל מתילצלולוז הן צמיגות ועלולות לגרום לבעיות נשימה אם זה הולך על הזימים.
- הניחו ארבע נקודות לייזר סביב עצב הראייה בעין שמאל והשתמשו בעין ימין, שאינה מטופלת, כבקרה פנימית.
