טכניקה לגרימת פגיעה מוחית טראומטית בראש סגור בזבובי דרוזופילה

תקציר

מקור: Sun, M., et al. שיטה חדשנית למודל אנצפלופתיה טראומטית כרונית בדרוזופילה. J. Vis. Exp. (2017).

סרטון זה מדגים הליך לגרימת פציעה טראומטית בראש סגור בזבובי דרוזופילה מורדמים באמצעות מכשיר תקיפה עם מפגע מונע גז. הפגיעה פוגעת בתפקוד העצבי ופוגעת ביכולת ההליכה.

פרוטוקול

1. הרכבת התקן התקיפה (איור 1)

1. הסר את הבוכנה מזרק שחפת 1 מ"ל. חותכים את החבית בסימן 1 מ"ל.
2. הסר מחסום תרסיס (גובה 3 מ"מ x קוטר 4 מ"מ) מקצה פיפטה של 200 μL והשתמש בו כמשפיע. מניחים את המשפיע בתוך חבית המזרק. הקש בעדינות על הקנה כדי להזיז את המשפיע לקצה הקצה, כאשר הצד השטוח מכסה את פתח הזרבובית.
3. חבר את קצה קצה החבית לצינורות פלסטיק המחוברים לווסת זרימת הפחמן הדו-חמצני (CO₂) של תחנת הרדמה דרוזופילה.
4. החזק את הקנה במאונך וחבר אותו למעמד מחזיק מהדק סטנדרטי כך שהמשפיע יישאר בתחתית הקנה.
5. שנה קצה פיפטה של 200 μL כדי ליצור את מחזיק הזבוב.
   1. חותכים 4 מ"מ מהקצה כדי ליצור פתח בקוטר 0.8 מ"מ, המאפשר לחשוף רק את ראש הזבוב.
      הערה: בית החזה וכל שאר חלקי גוף הזבוב יישארו בתוך קצה הפיפטה.
6. שנה קצה פיפטה של 1,000 מיקרוליטר ומכסה מחט מזרק של 1 מ"ל כדי ליצור את המחבר.
   1. חותכים 44 מ"מ מפתח הקצה. קח מכסה מחט מזרק באורך 6 מ"מ ודחף אותו בחוזקה לתוך החלק הנותר של קצה פיפטה 1,000 μL.

2. הפעלת מכשיר התקיפה

1. הרדימו נקבת זבוב בוגרת אחת בת יומיים באמצעות CO₂ על משטח זבובים.
2. העבירו אותו בעדינות למחזיק הזבובים בעזרת מברשת עדינה. הקש על המחזיק בעדינות כך שראש הזבוב ייראה מחוץ לקצה הקצה. אם חוטם הזבוב חשוף מחוץ לקצה, תחבו אותו בעדינות בחזרה לתוך הקצה עם מחט מזרק 1 מ"ל קהה.
   הערה: הקפד לשמור את חוטם הזבוב בתוך המחזיק. אחרת, הזבוב עלול למות מפציעה
מוצצת.
3. הדקו את מחזיק הזבוב לחבית המזרק עם המחבר כך שראש הזבוב פונה כלפי מטה.
4. הגדר את לחץ הגז ל- 100 kPa. התאימו את קצב הזרימה בהתאם לתכנון הניסוי.
5. הפעל וכבה במהירות את המתג הדו-מצבי של וסת הזרימה כך שהמשפיע יכה בראש הזבוב פעם אחת.
6. הרימו את מחזיק הזבוב והעבירו אותו מעל משטח זבובים. הפוך את מחזיק הזבוב וטפח בעדינות על הצד כדי לאפשר לעוף לצאת. השאירו את הזבוב בבקבוקון ריק כדי להתאושש.

תוצאות

איור 1. דיאגרמה של התקן השביתה. המכשיר השתמש בחומרים הזמינים במעבדת דרוזופילה: 1) קצה פיפטה 200 מיקרוליטר, 2) מזרק שחפת 1 מ"ל, 3) משפיע, 4) צינור חיבור המחובר לתחנת הרדמה דרוזופילה, ו -5) מחבר להידוק הקצה למזרק.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מחסום אירוסול	ארה"ב סיינטיפיק	1120-8810	משמש כגורם משפיע
טיפ פיפטה 200 ul	ארה"ב סיינטיפיק	1111-0706	משמש כמחזיק ראש זבוב
1000 ul טיפ פיפטה	ארה"ב סיינטיפיק	1122-1830	משמש כמחבר
1 מ"ל מזרק שחפת	בקטון דיקינסון	309625
צלחות פטרי 60 מ"מ	פישר סיינטיפיק	FB0875713A	משמש כזירות מעקב
וסת זרימה	ג'נסי סיינטיפיק	59-122WC
מחזיק מהדק/מעמד סטנדרטי	EISCO סיינטיפיק	CH0688
מברשת עדינה	ג'נסי סיינטיפיק	59-204
פלייפד	ג'נסי סיינטיפיק	59-114