הקמת מודל עכברי של פגיעה מוחית היפוקסית-איסכמית בילוד

תקציר

מקור: Kim, M., et al. הערכות נוירו-התנהגותיות במודל עכבר של פגיעה מוחית היפוקסית-איסכמית בילוד. J. Vis. Exp. (2017).

הסרטון מדגים את ההליך ליצירת מודל עכבר לחקר פגיעה מוחית היפוקסית-איסכמית בילוד. הוא מתאר את הצעדים לגרימת איסכמיה כירורגית וחשיפת בעל החיים להיפוקסיה כדי להחמיר נזק מוחי. לבסוף, הוא מראה כיצד להעריך את נגעי המוח המתקבלים, ולהבטיח שמודל העכבר מוכן לחקירה מדעית נוספת.

פרוטוקול

כל ההליכים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. מודל עכבר של פגיעה מוחית היילוד HI

1. מרדימים את הגורים עם isoflurane.
   1. הכניסו את הגורים (פחות מ-5) לקופסת הרדמה וסגרו את המכסה.
   2. הפעל את מערכת ההרדמה למשך כ -15 דקות; כוונן את הגז והאיזופלורן באמצעות מכונת הרדמה שולחנית. כוונן את מד זרימת החמצן ל-1.5 ליטר/דקה. כוונן את וופורייזר איזופלורן ל 3-5% להשראת הרדמה.
   3. לאחר 15 דקות, כוונן את וופורייזר האיזופלורן ל 1-2% לשמירה על הרדמה.
2. הניחו גור מורדם לחלוטין תחת מיקרוסקופ דיסקציה (בטן מול החוקר) ואבטחו אותו באמצעות נייר דבק.
3. בצע חתך ~ 0.7 מ"מ בצוואר באמצעות מספריים מעוקרים.
4. בזהירות להסיר את רקמת השומן באמצעות מלקחיים מעוקרים ולחשוף את עורק התרדמה הימני חד צדדי.
5. קשרו את עורק התרדמה הימני החד צדדי בתפר נספג 5-0.
6. תפרו את החתך בצוואר בתפר 5-0.
7. הניחו כל גור בתא היפוקסי חם בטמפרטורה של 37°C למשך שעה אחת להתאוששות. אין לסגור את מכסה התא.
8. 1 שעות לאחר הניתוח, כאשר הגורים ערים לחלוטין, לסגור את מכסה תא היפוקסיה ולהקטין את רמות הגזים כדי ליצור תנאים היפוקסיים (8% O₂ ו 92% N₂).
9. לאחר 90 דקות של היפוקסיה, החזירו את הגורים לכלובים שלהם.
10. שבוע לאחר הפגיעה המוחית HI, חזור על שלב 1.
    1. לאחר ההרדמה, לבצע חתך בקרקפת עם מספריים מעוקרים ומלקחיים כדי לזהות את הנגע במוח באזור posterolateral של ההמיספרה הימנית.
       הערה: טיפול זה גורם להיפוקסיה אצל גורים. הנוכחות וההיקף של פגיעה מוחית בכל העכברים מוערכים חזותית בעין בלתי דרך הגולגולת השקופה למחצה. כפי שנקבע על ידי גודל או נפח שינוי הצבע (כלומר, הנגע במוח), גורים מסווגים לקבוצות. אם אין פגיעה נראית לעין בקליפת המוח, העכבר מסווג לקבוצה "ללא פגיעה בקליפת המוח". אם יש פגיעה קליפת המוח נראית לעין (כלומר, נגע בהמיספרה הימנית), העכבר מסווג לקבוצת "פגיעה קליפת המוח". מכיוון שסיווג העכברים לקבוצות נעשה שבוע לאחר הניתוח, ניתן לשנות את הקבוצות כאשר המורפולוגיה של דגימות המוח מוגדרות בבירור בזמן ההקרבה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
תא היפוקסי	Jeung Do ביו & צמח Co	בונה ניסויים
מכשיר הרווארד מערכת הרדמה Fluovac	מכשיר הרווארד
קופסת הרדמה			קופסת אקריל
נוזל I-Fran (איזופלואורן)	חנה פארם ושות', בע ' מ		הרדמה כללית (איזופלורן 100 מ"ל)
עכברי CD-1	אוריינט ושות', בע ' מ
תפר ניילון כחול מונו לא נספג 5-0 50 ס"מ	Ailee ושות', בע ' מ	NB 521