יצירת מודל מורין עם זיהום במערכת העצבים המרכזית

תקציר

מקור: Shen, T., et al. A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Encephalitis-like Disease. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים את הדור של מודל עכבר עם זיהום CNS. גור יונק מוזרק עם הנגיף הן תוך גולגולתית והן intraperitoneally. הנגיף מתפשט, מדביק את מערכת העצבים המרכזית וגורם למוות תאי עצב ודלקת. הגור מוערך עבור סימפטומים של זיהום עם התקדמות המחלה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הליך זיהום

1. הכינו מלאי DENV2 (זן PL046) לא מותאם9 (המתקבל במקור מהמרכזים לבקרת מחלות בטייוואן, החל מ- 2.5 x 10⁷ ל- 1 x 10⁹ PFU/mL).
2. לדלל את מלאי הנגיף ל 1 x 10⁶ PFU עם Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 בינוני לנפח כולל של 40 μL.
3. מלא מזרק 0.3 מ"ל אחד מצויד מחט 30 G עם 10 μL (2.5 x^{10 5} PFU) של וירוס מדולל ומלא מזרק 0.3 מ"ל נוסף מצויד מחט 30 G עם 30 μL (7.5 x^{10 5} PFU) של וירוס מדולל.
4. החזיקו את העכבר היונק ICR (המכון לחקר הסרטן) בן 7 הימים ובצעו את השלבים הבאים.
   1. עבור הזרקה תוך מוחית, להחזיק את העכבר במצב נוטה על ידי לחיצה על auricle בין האצבע המורה לאגודל, ו תוך מוחי להזריק 10 μL של וירוס מדולל לאזור lambda, הנקודה בצומת של תפר sagittal ו lambdoid .
   2. לאחר ההזרקה התוך-מוחית, החזק את העכבר במצב שכיבה באמצעות האצבע המורה והאגודל, והזריק בעדינות 30 μL של וירוס מדולל תוך צפקי לתוך הבטן murine.
      הערה: כדי למנוע קניבליזם, 75% אלכוהול משמש כדי ליצור אובדן זמני של תחושת הריח של האם. בנוסף, מומלץ לכסות את ההמלטה בצואה ובשתן של אמם.
5. החזירו את העכברים היונקים לכלוביהם והמתינו 5 דקות כדי לבדוק את בטיחותם לאחר הגירוי בהתלהבות של עכברים, כולל הליכה ומציצת חלב אם.
   הערה: לרוב, עכברים מפגינים פעילות רגילה לאחר גירוי, ולא נראה שיש השפעות מזיקות בעקבות האתגר הטכני.
6. להעריך את ההתקדמות היומית של העכברים במונחים של משקל הגוף (באמצעות איזון מיקרוגרם), מחלה חריפה דמוית דלקת המוח הנגיפית (על ידי ניקוד המחלה כמתואר בסעיף 2), ושיעור הישרדות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מכון הזיכרון רוזוול פארק 1640 בינוני (RPMI)	גיבקו	11875-085	דילול וירוס
מזרק אינסולין 0.3-מ"ל	BD Ultra-FineII	328838	הזרקה תוך מוחית ותוך צפקית
מיקרובאלאנס	LabX של מטלר טולדו	מיכל שקד	עכבר משקל
DENV2 לא מותאם (זן PL046)	המרכז לבקרת מחלות של טייוואן	-	עכבר נגוע
המכון לחקר הסרטן (ICR) עכבר יונק	BioLASCO טייוואן ושות', בע מ	-	מודל המורין שלנו