יצירת דלקת עצבית הנגרמת על ידי וירוס במודל עכבר

תקציר

מקור: Laval, K. et al. Mouse Footpad Inculation Model לחקר תגובות נוירו-דלקתיות הנגיפיות הנגיפיות. J. Vis. Exp. (2020).

סרטון זה מדגים את יצירת דלקת עצבית במודל עכבר. עכבר מורדם עם מיקרו פצעים נלקח, וחיסון של וירוס pseudorabies (PRV) מוחל על הפצעים. הנגיף מדביק את העצבים ההיקפיים, מתפשט לגרעיני השורש הגבי (DRG), ומדביק עוד יותר את חוט השדרה והמוח. זיהום של נוירונים במערכת העצבים מוביל לתגובה חיסונית הגורמת לנזק עצבי, המוביל לדלקת עצבית.

פרוטוקול

כל ההליכים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. שחיקה של כרית כף הרגל של העכבר

1. מרדימים עכבר C57BL/6 (בן 5-7 שבועות) בהרדמת גז איזופלורן, המועבר במינון של 3% באמצעות מערכת הרדמה קטנה (תא).
   1. הניחו את העכבר במישור הכירורגי של ההרדמה על גבו, לפני החיסון, בכרית כף הרגל האחורית. חבר חרוט אף עם דיאפרגמה (חריץ בגודל מספיק כדי להתאים ללוע של החיה) לעכבר ולספק הרדמה גז איזופלורן במינון קבוע של 1.5%-2.0%.
   2. עקוב מקרוב אחר העכבר לתגובה לגירוי מכאיב שנוצר על ידי צביטה חזקה של הבוהן עם מלקחיים.
2. אחזו קלות בכרית רגל אחורית אחת בעזרת מלקחיים שטוחים.
   1. יש לשבור בעדינות את העור הזוהר של כרית כף הרגל האחורית בערך פי 20, בין העקב לכריות ההליכה, בעזרת לוח אמרי (100-180 גריט). אין לגרום לדימום על ידי שחיקה בתדירות גבוהה מדי או הפעלת לחץ רב מדי.
   2. בעזרת מלקחיים עדינים, מקלפים באיטיות את שכבת הקרנית המנותקת על ידי שחיקה כדי לחשוף את שכבת הבזל
   .

2. חיסון PRV

1. הכינו את החיסון נגד הנגיף מדולל לטיטר הרצוי במדיית DMEM המכילה 2% נסיוב בקר עוברי (FBS) ו-1% פניצילין/סטרפטומיצין (טבלת חומרים).
   1. כמת את מספר היחידות יוצרות הפלאק (PFU) במלאי הנגיף על תאי PK15 כדי לחשב ולתקנן את המינון הנגיפי ולדלל את החיסון הנגיפי בהתאם.
      הערה: במחקר זה, זן אלים של PRV (PRVBecker) שימש במינון של 8 x 10⁶ PFU. מינון זה עבר אופטימיזציה בניסוי מקדים קודם כדי להבטיח שכל בעלי החיים המחוסנים הראו תסמינים קליניים 82 שעות לאחר החיסון (hpi).
   2. יש לשמור את החיסון נגד הנגיף על קרח ולערבב בעדינות לפני השימוש.
2. הוסף טיפת 20 μL של חיסון וירוס (8 x 106 PFU) על כרית כף הרגל abraded (מתן מקומי). בצעו חיסוני דמה (בינוניים בלבד) במקביל.
3. בעדינות לשפשף 10x עם פיר של מחט כדי להקל על ספיחת הנגיף. הימנע גירוד עם נקודת המחט. חזור על שלב זה כל 10 דקות.
4. שמור את העכבר תחת הרדמה למשך 30 דקות עד שכרית כף הרגל השבורה יבשה.
5. לאחר הפסקת ההרדמה, יש לעקוב אחר העכבר עד שיוכל לשמור על עצם החזה ולהניח אותו בכלוב נפרד לצורך מעקב קליני ודגימה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
C57BL/6 עכברים (5-7 שבועות)	מעבדות ג'קסון
צלחת פטרי פטרי חד פעמית סטרילית מפוליסטירן 100 x 15 מ"מ	סיגמא-אולדריץ'	P5731500
מדיום הנשר המעובד של דולבקו (DMEM)	Hyclone, GE בריאות מדעי החיים	SH30022
חיץ הפופט של דולבקו Saline (PBS) פתרון	Hyclone, GE בריאות מדעי החיים	SH30028
סרום בקר עוברי (FBS)	Hyclone, GE בריאות מדעי החיים	SH30088
מספריים מעוקלים עדינים נירוסטה	FST	14095-11
איזותזיה איזופלורן	הנרי שיין	NDC 11695-6776-2
צינור מיקרוצנטריפוגה 2ml	דנוויל סיינטיפיק	1000945
מיקרו-צינור 1.5 מ"ל	זארשטדט	72692005
פניצילין/סטרפטומיצין	גיבקו	154022
מחט Precision Glide 18G	ב.ד.	305196