אינדוקציה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכבר

Abstract

מקור: Schmitz, K., et al. Bioluminescence והדמיית אינפרא אדום קרוב של דלקת עצבית אופטית ודלקת במוח במודל EAE של טרשת נפוצה בעכברים. J. Vis. Exp (2017).

בסרטון זה, מודל עכבר של טרשת נפוצה נקבע באמצעות אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE). העכבר מוזרק עם תחליב המכיל פפטיד עצבי ואדג'ובנט, המפעיל תגובה חיסונית המפעילה תאי T אוטוריאקטיביים. לאחר מכן מתבצעת הזרקה של רעלן שעלת (PTX) כדי להגביר את חדירות מחסום הדם-מוח, מה שמאפשר לתאי T האוטו-תגובתיים לחדור למוח. חדירה זו יוזמת מפל איתות שבסופו של דבר גורם לנזק למיאלין, המחקה את המצב הדה-מיאלינציה של טרשת נפוצה.

Protocol

1. אינדוקציה EAE בעכברי SJL/J

1. עכברים
   1. השתמשו בנקבות עכברי SJL/J בנות 11 שבועות ואפשרו להן להתרגל לחדר הניסוי במשך כ-7 ימים. השתמש n = 10 עכברים לקבוצה.
   2. כדי להעריך את ההשפעות התרופתיות, יש לתת באופן רציף את התרופה ואת הפלצבו עבור קבוצת הביקורת באמצעות מי שתייה או כדורי מזון החל מ-3 או 5 ימים לאחר החיסון (n = 10 לקבוצה). בשיא המחלה, יש לתת תרופות או פלצבו עם חלב או קורנפלקס ספוג במי סוכר 3%.
2. חומר חיסונים
   1. השתמש בערכת אינדוקציה EAE המורכבת מאנטיגן (פפטיד של חלבון פרוטאוליפיד, PLP139-151, תחליב 1 מ"ג/מ"ל) בתחליב עם אדג'ובנט שלם של פרוינד (CFA, Mycobacterium tuberculosis H37 Ra) ו-2 בקבוקונים (5 מיקרוגרם כל אחד) של רעלן שעלת ליופילי (PTX).
   2. להמיס את PTX (2 מיקרוגרם / מ"ל) במי מלח חוצצים פוספט 1x (PBS, כלומר, להוסיף 1.5 מ"ל של PBS לכל צינור PTX, לערבב היטב, להסיר עם אותו קצה פיפט ולהוסיף 1 מ"ל של PBS בצינור 50 מ"ל); מערבבים היטב.
3. חיסון
   1. הזריקו PLP/CFA תת עורית ב-2 חלקים, כל אחד 100 μL, שניהם בבסיס הזנב.
   2. להזריק 100 μL של PTX intraperitoneally (i.p.) פעמיים לכל עכבר, הראשון 1 - 2 שעות לאחר החיסון והשני ב 24 שעות.
   3. עבור עכברי הביקורת, הזריקו CFA ללא PLP (2 מנות של 100 μL) בתוספת PTX ללא PLP.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
תחליב PLP139-151/CFA	Hooke Labs , סנט לורנס, מסצ'וסטס	EK-0123	ערכת אינדוקציה EAE
רעלן שעלת	Hooke Labs , סנט לורנס, מסצ'וסטס	EK-0123	ערכת אינדוקציה EAE
ספקטרום IVIS לומינה	Perkin Elmer, Inc., Waltham, ארה"ב		מערכת ביולומינסנציה והדמיית אינפרא אדום
תוכנת LivingImage 4.5	Perkin Elmer, Inc., Waltham, ארה"ב	CLS136334	תוכנת ניתוח IVIS
איזופלורן	מעבדות אבוט, אילינוי, ארה"ב	26675-46-7	הרדמה