Cre-LoxP תיווך אינדוקציה של מומים מוחיים במערות במודל עכבר

תקציר

מקור: Choi, J. P., et al. אינדוקציה והדמיית מיקרו-CT של מומים מוחיים במודל עכבר. J. Vis. Exp. (2017)

בסרטון זה, גור עכבר מהונדס גנטית הנושא את הגן Ccm2 ומשני צדדיו אתרי loxP ו-Cre recombinase המאוחה לקולטן אסטרוגן משמש לגרימת מומים מוחיים במערות (CCM). מתן 4-hydroxytamoxifen מפעיל Cre בתאי אנדותל, מה שמוביל למחיקת Ccm2 והיווצרות CCMs במוח.

פרוטוקול

כל ההליכים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. השראת מומים מוחיים או CCMs במודלים עכבריים

1. קרוס Cdh5-CreErt2; עכברי Ccm2fl/fl עם Ccm2fl/fl ליצירת המלטות עם Cdh5-CreErt2; Ccm2fl/fl (Ccm2iECKO) גורים ובקרות ליטרמט (Ccm2fl/fl). Cdh5-CreErt2 ו-Ccm2fl/fl בעלי חיים תוארו בעבר19.
2. יש להמיס 4HT באתנול 100% ולאחסן בטמפרטורה של -80°C באליציטוטים של 30 μL 4-hydroxytamoxifen(4HT) (ריכוז: 10 מ"ג/מ"ל). ביום השימוש, לדלל aliquoted 4HT בשמן תירס (0.5 מ"ג / מ"ל).
3. הזריקו תוך גזסטרית 50 μL של 4HT (0.5 מ"ג/מ"ל) לגורים בילודים ב-P1 כדי לגרום לנגעי CCM ניסיוניים באמצעות מזרק אינסולין.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
4-הידרוקסי טמוקסיפן	סיגמא-אולדריץ'	H6278	כדי להפעיל את Cdh5-CreErt2
שמן תירס	סיגמא-אולדריץ'	C8267-500ML	כדי לדלל 4-hydroxy טמוקסיפן
מזרק אינסולין