כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.
1. הכנה לבדיקת ההתקפים המושרה על ידי חום
- הפעל את כפתור הפעלה בתא החום, ואחריו כפתור Heat On.
- הגדר את הטמפרטורה של תא החום ל-50 מעלות צלזיוס באמצעות לוח המקשים בבקר הטמפרטורה הדיגיטלי.
- המתן לפחות שעה אחת כדי לחמם את החדר ל-50 מעלות צלזיוס לפני הכנסת העכבר הראשון לתא. חימום מוקדם מבטיח חימום אחיד בתוך החדר.
- מרפדים את רצפת תא החום של העכבר במצעי קלח.
- התקן מצלמת הקלטת וידאו מול תא החום כדי להקליט כל ניסוי בדיקת התקפים המושרה על ידי חום.
- מרפדים צלחת פטרי בקוטר 140 מ"מ בשכבות עבות של נייר טישו ומניחים אותה על קרח כדי לשמש כרית קירור.
הערה: בסיום הבדיקה, עכברים בודדים יועברו לכרית הקירור המקוררת מראש כדי לסייע בהורדת טמפרטורת הגוף הגבוהה שלהם.
2. הכנת העכבר לבדיקת התקפים הנגרמת על ידי חום
- בחר 10 עכברים בוגרים (P30-P40), 5 הנושאים את המוטציה הגורמת לאפילפסיה, ו-5 מבני הזוג מסוג הבר לבדיקת התקפים המושרים על ידי חום.
הערה: עכברים מסוג בר, שאינם נושאים מוטציה הגורמת לאפילפסיה, אינם מציגים התקפים הנגרמים מחום בטמפרטורות מתחת ל-44 מעלות צלזיוס ומשמשים כקבוצת הביקורת.
- שקלו כל עכבר שישמש לבדיקת הסינון ורשמו את משקל גופו. יש להשתמש רק בעכברים במשקל 15 גרם ומעלה לבדיקה.
- מסך עכבר אחד בכל פעם בתא החום של העכבר.
- הרדמו את העכבר לזמן קצר למשך 10-15 שניות באמצעות כמה טיפות איזופלורן בתחתית צנצנת פעמון.
- הוציאו את החיה מצנצנת הפעמון והניחו אותה על מגבת נייר.
- ודא שהעכבר מורדם לחלוטין על ידי בדיקה שהעכבר אינו מגיב לצביטה מזיקה בבוהן.
- מצפים את קצה המתכת של בדיקת טמפרטורת פי הטבעת בחומר סיכה (כגון וזלין) ומכניסים אותו בעדינות לעכבר בעומק של פחות או שווה ל-2 ס"מ.
- אבטח את הגשושית הרקטלית לזנב העכבר בעזרת סרט כדי שהגשושית לא תצא במהלך הבדיקה.
הערה: לחלופין, הנח את החיה בקונוס מסנן עכבר והכנס את בדיקת הטמפרטורה הרקטלית. אבטח אותו על ידי הדבקתו לזנב.
- ודא שהגשושית הרקטלית מחוברת למולטימטר המציג את טמפרטורת הגוף הפנימית של העכבר.
- הניחו את החיה בכלוב טרי מרופד במצעי קלח, כלומר כלוב ההתאוששות.
- הפעל טיימר והמתן 5 דקות. התבונן בעכבר עד שהוא התאושש לחלוטין מההרדמה והעכבר פעיל ומטפח.
- בו-זמנית, עקוב אחר טמפרטורת הליבה של גוף העכבר עד שהוא מתייצב על 35-36 מעלות צלזיוס.
- בתום 5 דקות, שימו לב לטמפרטורת הגוף של העכבר. זוהי טמפרטורת הגוף ההתחלתית בזמן "0" דקות.
הערה: אם טמפרטורת הליבה של גוף העכבר נמוכה מ-35 מעלות צלזיוס, המתן לזמן נוסף עד שהחיה תתאושש מהיפותרמיה הנגרמת על ידי הרדמה.
- העבירו במהירות את העכבר הבודד לתא העכבר שחומם מראש. זה מסמן את תחילתו של ניסוי הניסוי. רק עכבר אחד מוקרן בזמן נתון.
3. בדיקת התקפים הנגרמת על ידי חום
- לאחר הנחת העכבר בעדינות על רצפת תא החום של העכבר שחומם מראש, סגור את דלת הפרספקס והפעל את המצלמה להקלטת וידאו של הניסוי.
- הפעל את שעון העצר. רשום את טמפרטורת הגוף של העכבר מהמדחום הרקטלי במרווחים של דקה אחת למשך הניסוי.
- במרווחי זמן קבועים, הגדל את הטמפרטורה של תא החום של העכבר כך שטמפרטורת הגוף של העכבר תעלה בקצב של 0.25-0.5 מעלות צלזיוס לדקה.
הערה: עלייה מהירה בטמפרטורת הגוף עלולה להוביל למכת חום או למוות ויש להימנע ממנה.
- בעקבות פרוטוקול זה, הגדל את הטמפרטורה של תא החום של העכבר ב-5 מעלות צלזיוס כל 10 דקות כפי שמוצג ב-איור 1A.
- ב-9.5 דקות, הגדר את הטמפרטורה של תא החום ל-55 מעלות צלזיוס, כדי לייצב את הטמפרטורה של תא החום ל-55 מעלות צלזיוס עד הדקה ה-10 כפי שמוצג בתצוגת הטמפרטורה הדיגיטלית.
- באופן דומה, העלה את הטמפרטורה ל-60 מעלות צלזיוס תוך 19.5 דקות כדי לייצב את הטמפרטורה של תא החום ל-60 מעלות צלזיוס עד הדקה ה-20. כל ניסוי לבדיקת פרכוסים נמשך 30 דקות.
- אם העכבר סובל מהתקף (משמיע קולות, מראה הנהון ראש, קלונוס, הארכת גפיים אחוריות, נופל על צידו או חווה עוויתות טוניות/קלוניות כלליות), רשום את המידע הבא.
- רשום את טמפרטורת הגוף של העכבר במהלך ההתקף (טמפרטורת סף ההתקף) ממדחום טמפרטורת פי הטבעת.
- רשום את מאפייני התנהגות ההתקף כגון הנהון ראש, קלונוס הגפיים הקדמיות, הארכת הגפה האחורית, נפילה על הצד ו/או התקפים טוניים/קלוניים כלליים (GTCS) המוצגים על ידי העכבר.
- הרם במהירות אך בעדינות את העכבר מהתא והניח אותו על כרית הקירור שהוכנה בשלב 1.6.
הערה: אם עכבר חווה התקפים בסולם ראסין 5 ומפגין קפיצה בלתי מבוקרת, זה יכול להיות קשה להרים את החיה מתא החום ולהעבירו לכרית הקירור בחוץ. עם זאת, התקף טיפוסי הנגרם מחום נמשך בין 30 ל-60 שניות.לפיכך, יש להוציא את העכבר מתא החום ולהניח אותו על משטח הקירור תוך 60 שניות מתחילת פרק ההתקף המושרה על ידי חום.
- המתן עד שטמפרטורת גוף העכבר תרד ל-36-37 מעלות צלזיוס, לפני העברתו לכלוב התאוששות. רק עכבר אחד מונח בכלוב התאוששות בכל פעם.
הערה: אין לערבב עכברים שעדיין לא שימשו להקרנה המושרה על ידי חום עם העכבר שכבר חווה את ניסוי הניסוי בהתקף המושרה על ידי חום.
- בעדינות ובזהירות, חותכים את הסרט בין זנב העכבר לחוט הבדיקה הרקטלי בעזרת מספריים כדי להסיר את הגשושית הרקטלית מהעכבר.
- נגב את קצה המתכת של הגשושית הרקטלית עם 70% אלכוהול ומגבונים לרקמות רכות כדי לשמור אותו מוכן לניסוי הבא.
- המשך להתבונן בעכבר בכלוב ההתאוששות עד שיחזור לפעילות רגילה (הליכה, טיפוח וכו'), לפני החזרת העכבר לכלוב הביתי שלו. זה מסמן את סוף ניסוי הניסוי עבור עכבר זה.
- רשום את מצב החיה לאחר הבדיקה - חיה והתאוששה ממפגש הבדיקה או מתה. התקפים בעוצמה גבוהה הכוללים קפיצה בלתי מבוקרת והתקפים טוניים/קלוניים כלליים יכולים לפעמים לגרום למותו של העכבר.
- אם עכבר אינו חווה התקפים הנגרמים מחום במהלך תקופת התצפית של 30 דקות או שטמפרטורת הגוף של העכבר מגיעה ל-44 מעלות צלזיוס, הסר את העכבר מתא החום והנח על משטח הקירור עד שטמפרטורת הגוף של העכבר תחזור ל-36-37 מעלות צלזיוס.
- אפס את הטמפרטורה של תא החום של העכבר ל-50 מעלות צלזיוס ואפשר לו להתייצב עד שטמפרטורת התצוגה בבקר הטמפרטורה הדיגיטלי תראה 50 מעלות צלזיוס.
- החלף מצעי קלח בין ניסויי עכבר בודדים.
