גרימת איסכמיה באמצעות חסימת עורק המוח האמצעי והצוואר המשותף במודל חולדה

תקציר

מקור: Wayman, C. et al., ביצוע מוח אמצעי דיסטלי קבוע עם חסימת עורק צוואר משותף בחולדות מבוגרות כדי לחקור איסכמיה קליפת המוח עם נכות מתמשכת. J. Vis. Exp. (2016)

סרטון זה מדגים את ההליך של ביצוע חסימה קבועה של עורק המוח האמצעי הדיסטלי, או MCAO, עם עורק הצוואר המשותף, או קשירת CCA, בחולדות מבוגרות כדי להדגים שבץ איסכמי. זה חוסם את זרימת הדם למוח, מה שמוביל למוות עצבי ויוצר מודל לחקר מנגנוני שבץ וטיפולים פוטנציאליים.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. ניתוח

1. השתמש בחולדות קשישות עם ברדס ליסטר בגיל 16-18 חודשים (250 עד 400 גרם) וגרם להרדמה עם איזופלורן 5% ב-1.5 ליטר לדקה O₂. לאחר השראת הרדמה, יש להפחית את רמת האיזופלורן ולשמור עליה בעומק הולם אך ממוזער לניתוח ( למשל , 1.5-2%). העבירו הרדמה לבעל החיים באמצעות מסכת פנים, והשתמשו במערכת ניקוי כדי להגביל את חשיפת המנתח לאיזופלורן.
   1. בצע את כל ההליכים עד, אך לא כולל קרניוטומיה בבעלי חיים מדומים, מכיוון שהליך זה עלול לייצר ליקויים התנהגותיים. שקול את מטרות הניסוי בעת תכנון ניסויי חסימת עורק המוח האמצעי (MCAO), והחליט אם יש לכלול או לא יש לכלול קבוצת דמה לבקרה לקרניוטומיה.
2. יש לתת משככי כאבים לפני או לפני הניתוח (Carprieve, 0.25 מ"ג/ק"ג, s. cut).
   1. יש להוסיף 1 מ"ל ל-19 מ"ל תמיסת מלח סטרילית של 0.9% כדי ליצור את תמיסת הציר ולהזריק 0.6 מ"ל לכל חולדה של 300 גרם. השימוש בקרפרייב עדיף על פני קרפרופן מכיוון שהראשון יציב בטמפרטורת החדר (RT).
3. לגלח את הפרווה באזור הצוואר הגחוני ואת האזור הטמפורלי בהמיספרה הימנית כדי לחשוף את העור. חיטוי אתרי הניתוח באמצעות ספוגיות אתנול.
   1. בצע צעד זה הרחק מאזור הניתוח כדי למזער את כמות הפרווה באתר החתך.
4. הניחו את החולדה על לוח שעם מכוסה וילון סטרילי במצב שכיבה על כרית חימום. מרחו קרם לידוקאין על האזורים המגולחים של הראש והצוואר. הכנס בדיקה רקטלית כדי לנטר ולשמור על טמפרטורת החיה בין 36.5-37.5 מעלות צלזיוס עם מערכת הומותרמית.
   1. יש למרוח משחת לקרילוב על העיניים כדי למנוע התייבשות. תן לחולדה זריקה של תמיסת אטרופין סולפט (0.05 מ"ל של תמיסה של 600 מיקרוגרם/מ"ל, תת עורית) כדי להפחית את הפרשות קנה הנשימה.
      הערה: חוקרים צריכים לשקול למדוד משתנים פיזיולוגיים כגון גזים בדם ולחץ.
5. לפני תחילת הניתוח, בדוק את נסיגת צביטת כף הרגל האחורית ורפלקסים מצמוץ כדי לאשר הרדמה מלאה.
6. תחת מיקרוסקופ מנתח, בצע חתך קו אמצע מרכזי של 2 ס"מ על הצוואר החשוף באמצעות אזמל. הזיזו את בלוטות הרוק בעדינות לרוחב קנה הנשימה משני הצדדים.
7. לולאה תפר משי שאינו נספג סביב העור המכסה את עורק הצוואר המשותף בצד אחד. משוך בעדינות את העור מהמקום באמצעות תפר המשי והדביק אותם ללוח השעם באמצעות סרט כירורגי כדי לחשוף את עורק הצוואר המשותף. נתח בזהירות את העורקים החופשיים מהפאשיה שמסביב והעצבים הנרתיקיים באמצעות מלקחיים עדינים.
   1. היזהר לא לפגוע בשריר או בעצבי הנרתיק במהלך שלב זה, מכיוון שהדבר יפגע בהאכלה, בבליעה ובנשימה.
8. לאחר חשיפת עורק הצוואר המשותף, השתמש בתפר משי שאינו נספג (5/0) כדי לבודד את הצוואר, תחילה להפריד את הצוואר מהעצב התועה על ידי ניתוח הפוך עם מלקחיים עדינים והיזהר לא ליצור מגע עם העצב. לאחר שכלי הדם נקשר (אך לא נקשר) עם התפר, הדביקו את קצות התפר יחד באמצעות סרט כירורגי כדי למנוע את ביטול שלב זה. הסר את התפרים המעכבים את העור שמעליו.
9. חזור על הפעולה עבור הצד השני.
10. הנח גזה סטרילית ספוגה במי מלח לתוך הפצע כדי לשמור על לחות הרקמות במהלך שארית הניתוח. יש לתפור את העור באופן רופף ולהניח גזה נוספת ספוגה במי מלח על האזור כדי למנוע התייבשות נוספת.
11. הניחו חולדות בתנוחה רוחבית ובצעו חתך בעור בנקודת האמצע בין המסלול הימני לתעלת השמע החיצונית. משוך את העור באמצעות עד חמישה מחזירי וו אלסטיים בקוטר 3 מ"מ המוצמדים ללוח השעם ולאחר מכן נתח את שריר הטמפורליס כדי לחשוף את הגולגולת.
12. הנח טפטוף מי מלח המותאם לגלגל האגודל מעל האתר הפתוח (קצב זרימה של כ-2 מ"ל/דקה) והגדר מערכת אספירטור להסרת פסולת עצם ולפינוי דימום קל מהאתר החשוף לאורך שלב זה של הניתוח.
    1. הנח את פיית אספקת המלח בנקודה הגבוהה ביותר של הגולגולת ליד האוזן, ואת פיית השואב בנקודה הנמוכה ביותר. כוונן את הגלגל במהלך דימומים כדי לספק יותר מלח לאזור כדי לדמיין טוב יותר את מקור הדימום לצריבה של כלי הדם, ולהפחית את משך הזמן שבו בעלי החיים נמצאים תחת הרדמה.
13. בצע קרניוטומיה באזור החשוף (כ-5 מ"מ על 5 מ"מ) באמצעות מקדחה דנטלית עם מקדחה גסה מצופה יהלום 1.6 מ"מ בכ-8,000 סל"ד, תוך הבטחת הפעלת לחץ מעגלי ורוחבי ולא לחץ כלפי מטה בזמן קידוח האזור החשוף. ברגע שהעצם דקה מספיק כדי להיראות שקופה לחלוטין, יש להסיר באמצעות מלקחיים.
14. השתמש בוו דוראלי תוצרת בית, המיוצר על ידי כיפוף קצה אחד של מלקחיים עדינים כ-180 מעלות ליצירת קשת, כדי לפתוח בזהירות את הדורה, היזהר להימנע מכלי הדם הגדולים על פני השטח, מכיוון שהם עדינים וקלים לקריעה.
    הערה: האזור החשוף במוח יחשוף את עורק המוח האמצעי (MCA); אורך הקטע הרצוי הוא כ-2 מ"מ (ראה איור 1).
15. קרש את ה-MCA מהמקום שבו עובר וריד המוח התחתון, עד לנקודת התפצלות העורקים ולאחר מכן לאורך הענפים הזנביים של ה-MCA באמצעות זוג מלקחיים דיאתרמיים עד לחסימה מלאה. השתמש במלקחיים דיאתרמיים זוויתיים של Jeweler עם קצוות מחודדים של 0.25 מ"מ.
    1. בעת סגירת העורק, שנה את זרימת המלח לפי הצורך כדי לשמור על אזור זה קריר, ולמנוע ממלקחיים הקרישה להיצמד לכלי הדם. כאשר הוא חסום, כלי הדם נראה שחור ולא אמור להיות סימן לזרימת דם; ניתן לראות את זרימת הדם בכלי דם חסומים חלקית.
    2. חתוך את ה-MCA בשלב זה כדי לאשר חסימה מלאה. בעזרת מספריים מיקרו-וסקולריים, חותכים מתחת למקום שבו וריד המוח התחתון חוצה את ה-MCA.
    3. כסו את האזור החשוף בכרית גזה ספוגה במי מלח לפני שתמשיכו לשלב הבא.
16. סובב את החולדה בחזרה למצב שכיבה ופתח מחדש את התפר הקשור באופן רופף על הצוואר כדי לחשוף מחדש את עורקי הצוואר. קשרו את עורק הצוואר באותו צד כמו ה-MCA החסום (מימין) לצמיתות על ידי קשירת קשר בתפר המשי סביב הצוואר, בעוד עורק הצוואר השמאלי חסום באופן זמני באמצעות קליפ עורק נירוסטה 13 מ"מ בלחץ של 125 גרם למשך 60 דקות. תפר באופן רופף את החתך בצוואר במהלך תקופה זו והניח מעל גזה סטרילית ספוגה במי מלח כדי למנוע התייבשות.
    1. שימו לב שהצד הימני של החיה יהיה בצד שמאל של המנתח, בהתחשב במיקום השכיבה.

תוצאות

איור 1. הגדרה כירורגית של מודל חסימת עורק המוח האמצעי הדיסטלי הקבוע. הציוד המשמש בהתקנה לכריתת הגולגולת של החולדה מוצג עבור ההמיספרה הימנית, והשיבוץ, מיקום השואב וטפטוף מי מלח סביב אתר כריתת הקרניקטומיה. כמו כן מוצגים המאפיינים העיקריים של כלי הדם; עורק המוח האמצעי (אדום) ווריד המוח התחתון (כחול) מוצגים, והאזור המוצל מציין היכן מתרחשת קרישת העורק. אישור החסימה מתבצע על ידי חיתוך ה-MCA מתחת לווריד המ...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
קרפרופן	נורברוק	Vm No; 02000/4229	לתת 0.25 מ"ג/ק"ג
אטרופין סולפט	AmTech	RXATRINJ-100
ספוגיות אלכוהול	UHS	20021
קרם לידוקאין (Emla)	אסטרהזניקה	12901	מרחו טיפה בגודל אפונה על הצוואר המגולח ועל האזורים הזמניים
מערכת שמיכה הומותרמית	מכשירי הרווארד	507222F
מלקחיים	כלים מדעיים יפים	11019-12
איזופלורן	אבוט	B506
תפרי משי	מנגנון הרווארד	723288
מערכת קוטריה	אשמן
0.25 מ"מ מלקחיים של תכשיטן	אשמן	8330349
מלקחיים דומונט משובחים	כלים מדעיים	11251-10
מערכת טפטוף מי מלח מונעת אגודל
מערכת שואב Vacusafe	אינטגרה ביו-סיינס	158320
16 מ"מ מצופה יהלום גס קוצי פלדה		K801 104 016
מקדחה דנטלית ידנית	NSK	NSKVMAXVRE (Handpiece NSKEX6B)
מספריים אביביים של Vannas	כלים מדעיים	15000-03
מספריים מיקרו-וסקולריים	מכשירי דיוק עולמיים	501790
4-0 תפרי ויקריל	אתיקון
קליפס ואפליקטור לכלי הדם
מיקרוסקופ הפעלה	צייס
מערכת הרדמה קומפקטית איזופלורן K/F גז יחיד	פתרונות VetTech
להבי אזמל מפלדת פחמן מס' 10	סוואן-מורטון	201
25 גרם מחטים	Terumo	NN-2525R
מזרקים (1 מ"ל ו-5 מ"ל)	Terumo	SS+01T1 / SS*05SE1
תמיסת מלח (נתרן כלורי 0.9%)	פרזניוס קאבי	PL 08828/0178
ניצני כותנה	ג'ונסון אנד ג'ונסון	5.00021E+12	לעקר לפני השימוש
גזה			לעקר לפני השימוש