ניתוק עצבים סימפתטי של עורקי הכליה במודל עכבר יתר לחץ דם המושרה על ידי אנגיוטנסין II

תקציר

מקור: Wang, M., et al., ניתוק עצבים כלייתי משופר הפחית יתר לחץ דם הנגרם על ידי עירוי אנגיוטנסין II. J. Vis. Exp. (2022)

סרטון זה מדגים הליך לניתוק עצבים סימפתטי של עורק הכליה במודל עכבר יתר לחץ דם המושרה על ידי אנגיוטנסין II, תוך שימוש בפנול כדי לשבש את תפקוד העצבים הסימפתטיים ולהפחית את לחץ הדם.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. ניתוק עצבים כלייתי דו-צדדי

1. בחר את העכברים עם לחץ דם גבוה (BP) ≥140/90 מ"מ כספית או עלייה של 25% בלחץ דם סיסטולי/לחץ דם דיאסטולי, שבוע לאחר עירוי Ang II.
2. רשום את משקל בעל החיים לפני הניתוח ובחר בעלי חיים במשקל מינימלי של 24 גרם לניתוח ניתוק עצבים כלייתי.
3. להרדים את העכברים באמצעות נתרן פנטוברביטל. אשר את עומק ההרדמה עם רפלקס צביטה שלילי בבוהן.
4. הסר את השיער על הבטן בעזרת מכונת גילוח. בצע הליך זה בזהירות וביסודיות כדי למנוע כל זיהום כירורגי.
5. הניחו את העכברים על שולחן הניתוחים, שמרו על הבטן למעלה וקבעו את גפיו בעזרת סרט. יש לחטא את עור הבטן עם פובידון-יוד, ואחריו שלושה מגבונים עם 70% אתנול.
6. בצע חתך בטן בקו האמצע הגחוני של 2 ס"מ באמצעות להב אזמל. משוך את המעי לאחור עם גזה ספוגה במי מלח של 37 מעלות צלזיוס כדי לחשוף את עורק הכליה השמאלי. נתח בזהירות אך בבוטות את השומן הרחק מעורק הכליה באמצעות פינצטה מעוקלת. (איור 1A-C).
7. חותכים את נייר השקילה למלבן בגודל זהה לעורק הכליה בעזרת מספריים חדים סטריליים. לעיון, חותכים את נייר השקילה באותו גודל כפי שמוצג על ידי הקו המקווקו ב-איור 1C.
   הערה: זה חלק קריטי בניתוח לנסות לחתוך כמה חתיכות מנייר השקילה בכל פעם כדי לשמור על אותה צורה.
8. טובלים את נייר השקילה בתמיסת פנול/אתנול של 10% למשך 30 שניות לפחות. מכסים את פני השטח של עורק הכליה השמאלי ועוטפים את הכלי בנייר השקילה, שומרים אותו למשך 2 דקות (איור 1D). השתמש בגזה כדי להגן על הרקמות שמסביב כדי למנוע מנייר השקילה לגעת בכליות ובמעיים שמסביב.
   הערה: תמיסת הפנול יציבה בצינורות פלסטיק אך לא בבקבוקוני זכוכית. לכן, יש להכין את הפתרון טרי לכל ניסוי.
9. בצע את אותו הליך עבור עורק הכליה הימני. בצע את ניתוח הדמה עם נייר שקילה טבול במי מלח.
10. מקם מחדש את השרירים למקומם הראשוני וסגור את הצפק עם תפרי ויקריל 6-0 בתפר קטוע. לאחר מכן, סגור את העור עם תפרי ניילון 4-0 קטועים. עקוב אחר כל העכברים עד להחלמה מלאה.

2. טיפול לאחר הניתוח

1. מרחו פובידון-יוד על החתך והניחו את החיה בשמיכה חשמלית מחוממת להתאוששות וניטור לאחר הניתוח.
2. עקוב אחר העכברים פעמיים ביום כדי להעריך אם יש אדמומיות, נפיחות וכאב או זיהום בבטן. ספק מלוקסיקם (0.5 מ"ג/ק"ג, SC) לכל העכברים כשעה לפני ו-24 שעות לאחר הליך ה-RDN.

תוצאות

איור 1: נוהל RDN עם נייר שקילה. (A,B) תמונות אנטומיות של עורק הכליה מעכברי C57BL/6 (ex vivo). (C) החלק בתוך שני הקווים המקווקוים מתייחס לאזור המכוסה על ידי נייר השקילה. (D) כיסוי פני השטח של עורק הכליה הדו-צדדי בנייר השקילה המתאים הטבול בתמיסת פנול/אתנול 10%. אל תכסה את נייר הסינון מעבר לקו המקווקו. * מציין את נייר השקילה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אנגיוטנסין II	סנגון ביוטק	CAS:4474-91-3	כדי ליצור מודל אנימול יתר לחץ דם
ניתוח לחץ דם	Visitech Systems	BP-2000	מדידת לחץ הדם של עכברים
משאבה מיני-אוסמוטית	תאגיד DURECT	CA 95014	למלא באנגיוטנסין II
נייר שקילה	סנגון ביוטק	F512112	להרוס את עצב הכליה עם נייר שקילה טבול בפנול; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.