טכניקת אבלציה מונחית סטריאוטקטית להסרת קליפת המוח השמיעתית בחולדות

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הכנת החולדה

הערה: ביצענו את הניסויים בחולדות זכרים כדי למנוע שינויים הורמונליים.

1. יש להרדים את בעל החיים באמצעות תערובת של קטמין הידרוכלוריד (30 מ"ג/ק"ג) וקסילזין הידרוכלוריד (5 מ"ג/ק"ג) המוזרקים תוך שרירית; במינון זה, יש להרדים את החולדה עמוק למשך כשעה.
2. צבטו את הבוהן של החולדה; היעדר רפלקס נסיגה מצביע על כך שהחיה מחוסרת הכרה לחלוטין. אם החולדה מגיבה לצביטה, תן הרדמה משלימה בשליש מהמינון הראשוני.
3. לגלח את הקרקפת ולחטא את אזור הניתוח עם פובידון-יוד.
4. הניחו את החיה על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורה של 38 מעלות צלזיוס וייצבו את ראש החיה במסגרת סטריאוטקסית באמצעות שני מוטות אוזניים ומוט נשיכה. היזהר כדי להימנע מניקוב קרום התוף עם מוטות האוזניים.
5. הגנו על העיניים על ידי מריחת טיפה של ג'ל עיניים או תמיסת מלח בסרום על כל עין.

2. מיקום ה-AC בעצם הטמפורלית של החולדה

1. בעזרת אזמל, בצע חתך לאורך קו האמצע כדי לחשוף את הגולגולת ולהחזיר את הפריאוסטאום המכסה את פני הגולגולת.
2. השתמש בקצה כותנה סטרילי כדי להסיר בעדינות את כל הדם המכסה את פני הגולגולת כדי לדמיין ברגמה, למבדה ו-0 בין-אוזני על פי אטלס פקסינוס ו-ווטסון של מוח העכברוש.
3. בצע חתך בשריר הטמפורלי ליד החדרתו הגבית על הגולגולת בעזרת אזמל. משוך את השריר החוצה באמצעות מחט וחומר תפר וקבע את חומר התפר למסגרת הסטריאוטקטית; זה יחשוף את העצם הטמפורלית. אם מופיע דימום, יש לשטוף במי מלח סטריליים קרים.
4. הנח מחט ישרה סטרילית במיקרומניפולטור הסטריאוטקטי, וודא שהיא מאובטחת במלואה.
5. הורד לאט את המחט עד שהיא ממש מעל פני הגולגולת, כך שקצה המחט מוגדר ל-0 בין-אוזני. הגדר נקודה זו כאפס וקבע קואורדינטות מנקודה זו.
6. בהתאם לאזור המוח המעניין, שנה את הקואורדינטות הסטריאוטקטיות. קבע את הקואורדינטות הללו על ידי שימוש באטלס Paxinos ו-Watson של מוח העכברוש. לאחר קביעת הקואורדינטות, הזז את המחט כך שתתאים לקואורדינטות אלה.
7. כוון את ה-AC באמצעות הקואורדינטות של ארבע הנקודות הבאות: A: anteroposterior (A/P) = -5.8 מ"מ, בינוני (M/L) = +/- 6.4 מ"מ; B: A/P = -2.7 מ"מ, M/L = +/- 6.4 מ"מ; C: A/P = -2.7 מ"מ, M/L = +/- 8.67 מ"מ; D: A/P = -5.8 מ"מ, M/L = +/- 8.67 מ"מ. הורד את המחט ימינה מעל העצם הטמפורלית כדי לדמיין כל אחת מארבע הנקודות הללו. בעזרת עט טוש, סמן את הנקודות על העצם הטמפורלית וחבר אותן על מנת לצייר מלבן; המלבן ישמש כמדריך לפתיחת חלון בעצם (איור 1).

3. חשיפה כירורגית של ה-AC

1. פתח את החלון באמצעות מקדחה חשמלית ומקדחה קטנה (0.6 מ"מ Ø). קדחו את היקף המלבן ב-8,000 סל"ד עד שהעצם מתמסרת. יש לקרר את משטח הקידוח על ידי שטיפה במי מלח סטריליים קרים כדי למנוע נזק למבנים תת-קורטיקליים. כאשר העצם מפנה את מקומה, ניתן לזהות ירידה בהתנגדות. היזהר לא לקדוח את המוח.
2. כאשר הגבולות רופפים, משוך את עצם הכיסוי בעזרת מלקחיים עדינים ואחסן אותה במי מלח סטריליים קרים.

4. אבלציה של AC

1. בעזרת מיקרוסקופ כירורגי (10X) חותכים בעדינות את קרומי המוח בעזרת סכין מיקרוכירורגית ומסירים אותם באמצעות שני מלקחיים מחודדים. אם מופיע דימום, יש לשטוף במי מלח סטריליים קרים.
2. שאפו בעדינות את ה-AC באמצעות מכשיר יניקה כירורגי (לחץ -0.24 בר) המחובר למחט קצה קהה סטרילית של 20 G. נקודה זו היא קריטית ויש לבצע אותה בזהירות רבה: שאפו רק את שש השכבות בקליפת המוח ולא את החומר הלבן שמתחתיו.
3. שאפו עד שהעורקים המחוררים מפסיקים לדמם.
4. בסיום השאיבה יש לכסות את האזור הפגוע בעצם שחולצה ולמרוח גזה המוסטטית נספגת.
5. תן לשריר הטמפורלי לשחזר את מקומו המקורי, ולאחר מכן תפר את העור באמצעות קליפסים לפצע (9 מ"מ). מרחו משחה אנטיביוטית. המשיכו למרוח משחה על הפצע פעמיים ביום למשך שלושה ימים.
   הערה: כל מריחה מורכבת משכבה דקה המונחת על הפצע.
6. יש להזריק בופרנורפין תת עורי בחלק האחורי של החולדה (0.05 מ"ג/ק"ג) כמשכך כאבים שעה אחת לאחר הניתוח, ולאחר מכן כל 8 שעות במהלך 72 שעות.
7. החזיקו את החיה על כרית החימום עד שתתעורר והחזירו אותה לכלוב הדיור שלה כדי להתאושש.

איור 1: תמונות של העצם הרקתית של החולדה בשלושה שלבים כירורגיים שונים. (A) העברת הקואורדינטות הסטריאוטקסיות של ה-AC לעצם הרקתית. הקואורדינטות של ארבע הנקודות הן: A: A/P= -5.8 מ"מ, M/L= +/- 6.4 מ"מ; B: A/P = -2.7 מ"מ, M/L = +/- 6.4 מ"מ; C: A/P = -2.7 מ"מ, M/L = +/- 8.67 מ"מ; D: A/P= -5.8 מ"מ, M/L= +/- 8.67 מ"מ. (B) הקואורדינטות משמשות כהתייחסות לציור מלבן על פני העצם הרקתית שינחה את פתיחת החלון. (C) מראה את החלון שנפתח בעצם לאחר הקידוח. ניתן לראות את קרומי המוח עם כלי הדם על פני המוח. R: rostral, D: גב.