הערכת התכווצות שרירים עם טיפול בחוסם עצבי-שרירי

תקציר

מקור: Lin, C. U., et al., צומת עצבי-שרירי במבחנה המושרה מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים על ידי בני אדם. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים את הערכת השריר באמצעות נוירונים מוטוריים מתורבתים, תאי שוואן ומיו-צינורות, ולאחר מכן טיפול בחוסם עצבי-שרירי לעיכוב התכווצות. גרפיקת זמן-תנועה מקודדת צבע מציגה גרפיקת זמן-תנועה מקודדת בצבע. אדום מציין את התנועה המהירה ביותר, וכחול מציין את האיטית ביותר.

פרוטוקול

1. התכווצות שרירים וטיפול בקורארה

1. כדי לעורר את התכווצות השריר, הוסיפו 25 מ"מ סידן כלורי (CaCl₂) למדיום התרבית. ניתן לראות את תנועת השרירים תוך 1\u20122 דקות.
2. הנח את צלחת 6 הבארות על הבמה של מיקרוסקופ הפוך. הקלט סרט של התכווצות מיוטיוב על ידי מיקרוסקופ תאים חיים.
3. כדי לעצור את התכווצות השריר, הוסף קוררה למדיום התרבית (300 ננוגרם/מ"ל). לאחר מכן, הקלט את הסרט כשלב 1.2.
4. פתחו את קובץ הסרט באמצעות תוכנה לניתוח וקטורי תנועה, ואחר כך לחצו על הלחצן 'ניתוח תנועה' כדי לנתח את הסרט.
   הערה: התכווצות השרירים מוצגת כגרפיקה של זמן-תנועה. הסרטים מקודדים בצבע כדי להראות את מהירות התנועה של מיוטיובים. האותות הנוצצים המקודדים בצבע מציינים את תנועות ה-myotubes כאשר הצבע האדום מציג את מהירות התנועה המהירה ביותר והצבע הכחול מראה את מהירות התנועה האיטית ביותר.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מדיום, גורמי גדילה וריאגנטים	פריט	מותג	חתול. מספר
	B27, Gibco	גיבקו	12587-001
	BDNF	מערכות מו"פ	248-BD
	ECM, Matrigel (גורם גדילה מופחת)	קורנינג	356230
	GDNF	מערכות מו"פ	212-GD
	ציפוי יונים	ג'אול	JEC3000FC
	מיקרוסקופ תא חי	ניקון	מיקרוסקופ ליקוי Ti
	תוכנה לניתוח וקטורי תנועה	סוני	SI8000
	N2, Gibco	גיבקו	17502-048
	מדיום נוירו-בסיסי	גיבקו	21103-049
	NT3	מערכות מו"פ	267-N3