טכניקה לגרימת התקפים פוסט טראומטיים במודל עכבר באמצעות פציעה טראומטית של ירידה במשקל

תקציר

מקור: Shandra, O. et al., השראת אפילפסיה פוסט-טראומטית במודל עכבר של פגיעה מוחית טראומטית מפושטת חוזרת ונשנית. J. Vis. Exp. (2020)

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. נוהל ירידה במשקל

1. הנח את העכבר בתא אינדוקציה. הגדר את זרימת החמצן והוואקום ל-1 ליטר לדקה ואת רמת גז האיזופלורן ל-3%-5%. להרדים את העכבר למשך 5 דקות.
2. הסר את העכבר מתא האינדוקציה והנח אותו על כרית קצף. בדוק את היעדר התגובה לצביטה בבוהן או בזנב.
3. יש לתת משכך כאבים (0.1 מ"ג/ק"ג בופרנורפין) תת עורי. אם ניתוח האלקטרואנצפלוגרפיה (EEG) מבוצע באותו יום, יש לתת את הבופרנורפין תת עורי בשילוב עם קרפרופן אנטי דלקתי לא סטרואידי (5 מ"ג/ק"ג).
4. יש לתת את תמיסת הנתרן לקטט (3 מיקרוליטר לגרם ממשקל החיה) באופן תת עורי לפני או אחרי הפגיעה האחרונה. ניתן לערבב את תמיסת הנתרן לקטט עם משככי הכאבים למתן מהיר בזריקה אחת.
   הערה: תמיסת הנתרן לקטט מכילה תערובת של נתרן כלורי, אשלגן כלורי, סידן כלורי ונתרן לקטט במים. שלב זה עוזר להחליף נוזלים ואלקטרוליטים, ומסייע להתאוששות.
5. מקמו את ראש העכבר מתחת לצינור ירידת המשקל (איור 1A) והניחו דיסק שטוח מפלדת אל-חלד (קוטר 1.3 ס"מ, עובי 1 מ"מ ומשקל 880 מ"ג) במרכז הראש, בין קו העיניים והאוזניים.
   הערה: דיסק זה מפזר את הפגיעה על פני הגולגולת (איור 1B).
6. הסר את הסיכה בצינור ירידת המשקל כדי לשחרר את מוט המשקל של 100 גרם מגובה של 50 ס"מ. כדי לגרום לפציעה מזויפת עבור עכברי הביקורת, הסר את מוט המשקל מהצינור כדי למנוע שחרור מקרי של הסיכה וירידה במשקל.
   הערה: ראש החיה חייב להיות ממוקם שטוח, כך שהמוט ייפול בחופשיות על כל שטח הדיסקה.
7. הניחו את החיה חסרת ההכרה על גבה להתאוששות על כרית חימום מכוסה במגבת סופגת פולילרית סטרילית. ניתן למדוד את זמן ההתאוששות של רפלקס היישור (כלומר, הזמן שלוקח לעכבר ליישר את עצמו מגבו) כקריאה לזמן שבו הוא מחוסר הכרה.

תוצאות

איור 1: מודל העכבר של פגיעה מוחית טראומטית מפושטת (TBI) שחוזרת על עצמה. (A) מכשיר לירידה במשקל. (a1) צינור ירידה במשקל. (a2) מוט משקל 100 גרם. (a3) סיכה המחזיקה את המוט. (a4) חוט כדי להרים את המוט כלפי מעלה אם משנים את הגובה או מסירים את המוט מצינור ירידת המשקל. (a5). כרית קצף להנחת החיה מתחת לצינור...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
בופרנורפין	Par Pharmaceuticals, Cos. Inc., ספרינג ואלי, ניו יורק, ארה"ב	60969
עכברי C57BL/6	מעבדות הרלן		זכר, בן 12-16 שבועות
עכברי C57BL/6	מעבדת ג'קסון		זכר, בן 12-16 שבועות
קרפרופן	Zoetis Services LLC, Parsippany, NJ, USA	26357	הערה: תרופה זו מתווספת במהלך ירידה במשקל רק אם השתלת אלקטרודות סטריאוטקטיות תבוצע באותו היום
נוזל פלוריסו להרדמה באינהלציה	MWI Veterinary Supply Co., ארה"ב	502017
דיסק נירוסטה			בהתאמה אישית
רפידות מגבות סופגות סטריליות מרופדות פולי	קרדינל הלת', ארה"ב	3520