אינדוקציה ניסיונית של גלאוקומה באמצעות חסימת זווית אירידו-קרנית במודל עכבר

תקציר

מקור: Bunker, S., et al. גלאוקומה ניסיונית הנגרמת על ידי הזרקת עיניים של מיקרוספירות מגנטיות. J. Vis. Exp. (2015)

בסרטון זה, חולדה מורדמת עוברת הליך עיניים שבו מוזרקים חרוזים מגנטיים לתוך החדר הקדמי תחת שדה מגנטי כדי לחסום את הזווית האירידו-קרנית. חסימה זו חוסמת את הרשת הטרבקולרית, מונעת ניקוז הומור מימי ומובילה ללחץ תוך עיני מוגבר, הפוגע בתאי הגנגליון ברשתית ובעצב הראייה. זה מפתח מצב דמוי גלאוקומה.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. אינדוקציה ליתר לחץ דם בעיניים

1. לגרום לגלאוקומה ניסיונית על ידי העלאת הלחץ התוך עיני (IOP) באמצעות הזרקה חד צדדית של מיקרוספירות פרמגנטיות לתוך החדר הקדמי של חולדות בראון נורבגיה. חולדות פיגמנטיות אחרות עשויות להתאים, אם כי המשתמש יצטרך לאמת אותן תחילה.
2. בית 250-300 גרם נקבות מגדל לשעבר של חולדות חומות נורווגיות בסביבה קבועה עם תאורה נמוכה (40-60 לוקס) כדי למזער את התנודות היומיות ב-IOP, עם גישה למזון ומים.
3. בצע מדידות IOP בסיסיות בבעלי חיים ערים8 לפני הרדמה והזרקת חרוזים, באמצעות טונומטר ריבאונד מכויל לשימוש בעין חולדה9. IOP נלקח כממוצע של חמש קריאות.
4. להרדים חולדות עם 37.5 מ"ג/ק"ג קטמין ו-0.25 מ"ג/ק"ג מדטומידין הידרוכלוריד המועברים תוך צפקית. אשר את עומק ההרדמה על ידי בדיקת רפלקסים בכף הרגל האחורית של בעל החיים לפני מריחת פובידון-יוד (ראה שלב 1.5) והזרקת חרוזים (ראה שלב 1.8). יש לתת 0.5% פרופרקאין הידרוכלוריד לשיכוך כאבים.
   הערה: אין להרחיב את האישון בשום שלב. זה יעזור לחרוזים להתיישב טוב יותר בזווית האירידוקרנית ולמנוע קשירה לעדשה. יש למרוח משחה לעיניים כדי למנוע התייבשות בקרנית על העין הנגדית שלא נותחה.
5. יש לשטוף את העין הניתוחית עם 5% פובידון-יוד במים 5 דקות לפני ההזרקה.
6. לאחר 5 דקות, נדפו את הפובידון יוד באמצעות גזה סטרילית ושטפו את העין בתמיסת מלח סטרילית של 0.9%. שמור על לחות העין במהלך ההרדמה עם מריחה קבועה של מי מלח סטריליים.
7. הניחו מגנט טורואידלי סביב העין.
8. הזרקו 25 מיקרוליטר של תמיסה המכילה 30 מ"ג/מ"ל של מיקרוספירות מגנטיות מעוקרות של 8 מיקרומטר בקרינת גמא בתמיסת המלח המאוזנת של האנק (HBSS) לתוך החדר הקדמי באמצעות מחט משופעת של 33 גרם.
   1. להכנת חרוזים, יש לשטוף על ידי השעיה מחדש, ולאחר מכן צנטריפוגה 3 פעמים ב-10,000 x גרם למשך 5 דקות עם 1 מ"ל HBSS לפני הכנת התמיסה הסופית של 30 מ"ג/מ"ל. שמור על תנאים סטריליים לאורך כל הדרך.
   2. להזרקה, היזהר להימנע מהחדרת המחט לקשתית, כדי למזער את הסיכון לטראומה בקשתית. ניתן למנוע זאת על ידי כיוון המחט המשיק למשטח הקרנית, במקביל לקשתית ככל האפשר. זה גם יעזור למזער את אובדן החרוזים מאתר ההזרקה.
      הערה: הזרקת חרוזים בקצב מהיר כדי להבטיח פיזור אחיד סביב הזווית האירידו-קרנית, שהיא קריטית להעלאת IOP. בנוסף, אחסן חרוזים, מחטים וטבעות מגנטיות בנפרד כך שהחרוזים לא ייווצרו אשכולות, מה שמקשה על העמסתם למזרק ולהזריק, והמחט לא תהפוך לממוגנטת.
9. השאר את המחט במקומה למשך דקה אחת לאחר ההזרקה כדי להבטיח שהחרוזים ישקעו בזווית האירידוקרנית כדי לעכב ניקוז מימי מהרשת הטרבקולרית. זווית קלה של המחט לאחר שהחרוזים התייצבו בתחילה כדי לאפשר דליפה מסוימת של מים, כדי למזער עליות חולפות ב-IOP. בסוף הניתוח, שטפו את המחט עם תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS), לאחר מכן 70% אתנול, ולאחר מכן מים מזוקקים, כדי להבטיח את המשך השימוש במחט בהליכים נפרדים. לחלופין, אפשר להשתמש במחטים חד פעמיות אם השילוב הנכון של מד ומזרק זמין. אופציונלי: ניתן להשחיז מחטים באמצעות שיפוע כדי להאריך את השימוש בהן.
10. בשלב זה במידת הצורך, הסר את המגנט והשתמש בו כדי לצייר חרוזים לאזורים עם כיסוי לא שלם.
11. השאירו את המגנט במקומו סביב העין למשך 10 דקות נוספות לאחר ההזרקה כדי להבטיח שהחרוזים ישקעו היטב בזווית האירידו-קרנית.
12. הרדמה הפוכה באמצעות 0.25 מ"ג/ק"ג אטיפמזול הידרוכלוריד.
13. יש לתת כלורמפניקול או משחה אנטיביוטית אחרת, לדוגמה, גנטמיצין או טרמיצין באופן מקומי למניעת זיהום, ו-0.5% פרופרקאין הידרוכלוריד לשיכוך כאבים. השאירו את בעלי החיים להתאושש על מחצלת חום עד שהם יחזרו לתנועה, ואז העבירו אותם לקופסה חמה וספקו להם תזונה נוספת, כגון תוסף מזון או תזונה רגילה לחה, עד להשלמת ההחלמה. יש לתת משככי כאבים סיסטמיים או מקומיים לבעלי חיים המראים סימני כאב 24 שעות לאחר הניתוח. אם תסמינים אלה נמשכים למרות הטיפול, יש להרוג בעלי חיים באופן הומני.
14. השתמש בעין הנגדית כבקרה לא מנותחת.
15. בצע מדידות IOP כל 2-3 ימים לאחר מתן החרוז וכל 2-3 ימים לאחר מכן באמצעות טונומטר ריבאונד מכויל לשימוש בעין העכברוש.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
250-300 גרם נקבות חולדות מגדל לשעבר של נורווגיה חומה	הרלן בריטניה	203
טונומטר ריבאונד של Tonolab	Tiolat	TV02
קטאסט (קטמין)	בריאות בעלי חיים בפורט דודג'	BN1000118	37.5 מ"ג/ק"ג
דומיטור (מדטומידין הידרוכלוריד)	אוריון פארמה	140-999	0.25 מ"ג/ק"ג
פובידון יוד	אקולאב	BN4369LE10	5% in H2O
תמיסת מי מלח של Minim	באוש ולומב	PL00033/5017
מגנט טורואידלי	סופרמגנטי	R-10-07-03-N
מיקרוספירות מגנטיות	מעבדות בנגס	UMC4N/9692
HBSS	Invitrogen	14025
33-guage bevelled needle	המילטון	7747-01	מחט מותאמת אישית
מזרק טיפ לואר	המילטון	80601
אנטיסדאן (atipemezole hydrochloride )	אוריון פארמה	141-003	0.25 מ"ג/ק"ג
משחת כלורמפניקול	מדיקום	18956-0005