מידול פציעות ראש חוזרות ונשנות של זעזוע מוח במודל עכבר

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. טיפול בבעלי חיים

1. השתמש בעכברי C57BL/6J זכרים בני 3-4 חודשים. ספק מצעים, חומרי קינון, מזון ומים ad libitum. שמור על העכברים בטמפרטורות סביבה מבוקרות ב-20 - 22 מעלות צלזיוס עם מחזורי אור קבועים של 12 שעות / חושך של 12 שעות.

2. הכנה לפני אימפקציה

1. חבר קצה מתכת מצופה גומי סיליקון בהתאמה אישית להתקן פגיעה סטריאוטקסי אלקטרומגנטי. ודא שהחלק התחתון השטוח של הקצה מקביל לפני השטח של קצה הבדיקה (איור 1A).
2. להרדים את העכבר עם 4% איזופלורן ואחריו הרדמה תחזוקתית של 2.5% איזופלורן. בדוק את ההרדמה באמצעות מד הזרימה. עקוב אחר רמת ההרדמה עד שהחיה תגיע לרמת הרדמה כירורגית על ידי הצגת אובדן רפלקס נסיגת הדוושה.
3. הנח את העכבר במצב נוטה על כרית חימום. השתמש בחרוט אף בצורת משפך כדי לשמור על העכבר תחת הרדמה. לגלח את הראש לחלוטין בעזרת גוזם. השתמש במשחת עיניים וזלין על עיני העכבר כדי למנוע יובש בזמן הרדמה.

3. הגדרת פרמטרי השפעה

הערה: מערכת ההשפעה כוללת תיבת בקרה להגדרת פרמטרי השפעה, מפעיל לביצוע האימפקט, ומסגרת סטריאוטקטית דיגיטלית עם צירים בעלי 3 תנועות.

1. הגדר מראש את מהירות התקן הפגיעה ל-4 מ'/שנייה וזמן השתהות ל-240 מילי-שניות על תיבת הבקרה.

4. מקם את מרכז ההשפעה

1. שים כרית חימום רכה מתחת לגוף החיה כדי לשמור על טמפרטורת הגוף קרובה ל-39 מעלות צלזיוס. התקן את העכבר במסגרת סטריאוטקטית במצב שכיבה עם מוטות האוזניים הקהים.
2. הורד את קצה הפגיעה קרוב לראש העכבר על ידי הזזת מנהל ההתקן Z. כוונן את קצה הפגיעה השטוח (קוטר 9 מ"מ) על ידי הזזת נהגי ה-X וה-Y באמצע הדרך לקואורדינטות המטרה מעל התפר הסגיטלי.
3. ודא שקצה אחד של קצה הפגיעה מקביל אנכית לקו אופקי דמיוני המשורטט בין שתי האוזניים ( איור 1C). מרכז הפגיעה תואם את התפר הסגיטלי המרכזי באמצע הדרך בין התפרים הבין-מצחיים והלמבדואידים (9 מ"מ בין-אוזניים עד 0 מ"מ, 4.5 מ"מ לרוחב).

5. הגדרת עומק השפעה

1. כדי להגדיר נכון את עומק הפגיעה, השתמש בקצה בדיקה נוסף כדי להחליף את קצה הפגיעה המבודד בציפוי גומי סיליקון.
2. כדי לוודא שאין תזוזה של מרכז ההשפעה לאחר החלפת טיפים, הגדר את ערוץ X ו-Y בלוח הבקרה הסטריאוטקסי הדיגיטלי לאפס לפני החלפת הקצוות.
3. הזז את קצה הבדיקה למרכז אזור הפגיעה על ידי הזזה ידנית של כונני ה-X וה-Y.
4. הצמד את חיישן המגע לזנב העכבר.
5. הזז את הפגיעה (כונן Z) כלפי מטה עד שקצה הגשושית נוגע במשטח אתר הפגיעה.
6. הגדר את ערוץ Z בלוח הבקרה הסטריאוטקסי לאפס.
7. הזז את קצה הפגיעה בחזרה לאזור הפגיעה על ידי כוונון ידני של דרייברים X ו-Y (לא לחצני האפס בלוח הבקרה הסטריאוטקסי הדיגיטלי) עד שמנהלי ההתקן X ו-Y יהיו אפס (היכן שקצה הפגיעה היה ממוקם קודם לכן).
8. משוך את המפעיל על ידי הזזת מתג הנסיגה בתיבת הבקרה. הזז ידנית את האימפקטור למטה (מנהל התקן Z) ב-4 מ"מ.

6. השפעה

1. הפעילו את ההשפעה על ידי לחיצה על מתג הפגיעה בתיבת הבקרה והשיגו עומק עיוות של 4 מ"מ.

7. לאחר אימפקציה

1. מדדו את הזמן מהפגיעה ועד לנשימה הראשונה של העכבר באמצעות טיימר.
2. הסר את החיה מהמכשיר והנח אותה על כרית חמה כדי לשמור על טמפרטורת גופה. אין להשאיר את בעל החיים ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה על החזה.
3. אפשר התאוששות לפני החזרת החיה בחזרה לכלוב נקי. אין להחזיר בעל חיים לחברת בעלי חיים אחרים עד להחלמה מלאה.
4. התבונן ושקול את העכברים מדי יום. אם העכברים מראים סימני כאב, יש להזריק להם מלוקסיקם תוך צפקי במינון של 1 - 2 מ"ג/ק"ג כל 12 - 24 שעות.

8. אימפקט חוזר

1. תן לעכברים פציעות נוספות בימים 4, 7 ו-10 לאחר הפציעה הראשונית (מרווח של 72 שעות בין פגיעה).

איור 1. מודל עכבר של פגיעת ראש חוזרת ונשנית. (A) קצה מצופה גומי סיליקון בעובי 1 מ"מ בהתאמה אישית בקוטר 9 מ"מ עם קצה בדיקה. (B) עכבר מותקן במסגרת סטריאוטקטית במצב שכיבה עם כרית חימום רכה מתחת לגוף. (ג) מיקום מרכז ההשפעה. קצה קצה הפגיעה מקביל אנכית לקו אופקי דמיוני המשורטט בין שתי האוזניים. מרכז הפגיעה מתאים באמצע הדרך בין תפרים בין-מצחיים למבדואידים (9 מ"מ בין-אוזניים עד 0 מ"מ בין-אוזני, 4.5 מ"מ לרוחב). (ד) דום נשימה מוגדר כתקופות קצרות של הפסקת נשימה חולפת. ממוצע ו-SD מוצגים בפאנל התחתון.